胆囊切除术后肠道菌群改变与结直肠癌的关系.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要Ⅲ 常用缩写词中英文对照表Ⅵ 前言1 1.对象与方法1 1.1 试验方法1 1.2 实验分组2 1.3 样本采集2 1.4 技术路线2 1.5 主要试剂2 1.6 主要试验仪器3 1.7DNA 抽取及PCR 扩增3 1.8 基因测序及文库制备 3 1.9 信息分析3 1.10 统计学分析4 2.结果4 3.讨论8 4.结论9 参考文献10 文献综述12 致谢25 个人简历26 胆囊切除术后肠道菌群改变与结直肠癌的关系 摘 要 目的：结直肠癌 （colorectal cancer，CRC）是发病及死亡率均呈持续上升态势的恶 性消化道肿瘤之一。研究认为多因素参与了CRC 的发生发展，近年来研究发现胆 囊切除术可导致肠道微生物失调，继而胆酸代谢障碍，使患者处于结直肠癌的高危 状态，然而究其肠道菌群特征变化是否因胆囊切除术后改变知之甚少。鉴于此，本 研究采用高通量测序技术，探寻胆囊切除术后患者肠道菌群的一些改变在多样性、 分布及相对丰度的方面，目的研究结直肠癌发病原因是否涵盖胆囊切除术后影响菌 群变化这一方面。 方法：选取在山西省人民医院就诊的，位于2018年3 月至2019年9 月时间段内， 并符合要求的入组人员20例，其中健康志愿者4 例、LC 术后患者5例、结直肠癌 患者6例、LC 术后结直肠癌患者5例，并采集相应粪便标本20例，对采集的粪便 样本分组 （A、B、C、D 组）。再对样本相关细菌进行DNA 提取与检测，PCR 扩 增、产物纯化等相关操作，再通过生物信息学分析获得特定实验样品中细菌物种组 成、复杂性及分布变化等诸多信息。 结果：实验共得到了835502 条高质量扩增特征序列 （即OTU），后按99%序列相 似性聚类，为获得物种注释信息对比核糖体RNA 数据库。统计分析每个样品在分 类水平 （界门纲目科属种）上的序列数目与总序列数相比。Alpha 多样性稀释曲线 趋于平缓，基本覆盖了99.9%的细菌物种。Shnnon 指数反应菌群多样性，在各组间 无明显差异 （P＞0.05），chao1指数反映物种丰富度的指标，各组间无明显差异 （P ＞0.05）。在门水平上，优势菌在A、B、C、D 四组间十分相似，类如：壁厚菌门 （Firmicutes）、拟杆菌门 （Bacteroidetes）、变形菌门 （Proteobactenia），几乎占 据了肠道菌群的90%以上。其中在肿瘤组中Verrucomicrobia 的菌群丰度比健康组 明显增加，且差异具有统计学意义 （P＜0.05）；TM7 的菌群相对丰度在B 组比A 组增高，差异存在统计学意义 （P＜0.05）；D 组的Fusobacteria 菌群相对丰度比B 组的减少，且差异具有统计学意义 （P＜0.05）；而D 组的Actinobacteria 比C 组的 Actinobacteria 的菌群相对丰度高，存在统计学意义（P＜0.05）；C组的Synergistetes I 菌群比其余各组菌群的相对丰度高，差异具有统计学意义 （P＜0.05）。在属的水平 上，消化链球菌属 （Peptostreptococcaceae）、普雷沃菌属 （Paraprevotellaceae）、 疣微菌门 （Verrucomicrobia）、普氏菌属 （Prevotella）、颤螺菌 （Oscillospira）在 肿瘤组 （C+D 组）的菌群的相对丰度比健康组 （A+B 组）增高显著，有统计学意 义 （P＜0.05）；梭杆菌 （Fusobacteria）菌群的相对丰度在B 组、C组均比A 组的 增高显著，有统计学意义 （P＜0.05）；巨单胞菌属 （Megamonas）、普雷沃菌属 （Paraprevotellaceae）、普氏菌属（Prevotella）、TG5、月形单胞菌属（Selenomonas） 在D 组比C组菌群的相对丰度明显增加，且差异具有统计学意义 （P＜0.05）。 结论： 1 与健康人相比肠道菌群微生态在结直肠癌患者中发生了显著改变。 2 胆囊切除术后患者的肠道菌群多样性与健康人比未见明显差异。 3