灯盏花素改善胰岛素抵抗作用机制网络药理学分析及实验验证.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要 III 常用缩写词中英文对照表 V 前 言 1 第一部分 基于网络药理学的灯盏花素改善胰岛素抵抗作用机制分析 3 1 资料与方法 3 1.1 软件与数据库 3 1.2 化学成分的获取与活性成分的确定 3 1.3 活性成分作用靶点的获取 4 1.4 胰岛素抵抗相关作用靶点的筛选 4 1.5 网络构建与分析 4 1.6 分子对接验证 5 1.7 生物功能和通路富集分析 6 2 结 果 7 2.1 灯盏花素活性成分和靶点筛选 7 2.2 网络构建与可视化分析 7 2.3 分子对接结果 8 2.4 生物功能与通路分析 9 3 讨 论 12 3.1 中药与网络药理学结合研究的可行性 12 3.2 灯盏花素改善胰岛素抵抗作用机制网络药理学分析 12 第二部分 灯盏花素对HepG2 细胞胰岛素抵抗模型作用及机制初探 14 1 材料与方法 14 1.1 材料 14 1.2 实验方法 17 2 结 果 26 2.1 HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的建立 26 2.2 灯盏花素对各组细胞增殖的影响 28 2.3 灯盏花素对IR-HepG2 细胞葡萄糖消耗的影响 29 2.4 实时荧光定量PCR （qRT-PCR ） 30 2.5 Western blot 31 3 讨 论 32 3.1 IR-HepG2 细胞模型的建立 32 3.2 灯盏花素对IR-HepG2 细胞葡萄糖消耗的影响 32 3.3 灯盏花素对IR-HepG2 细胞模型相关蛋白和基因表达的影响 33 4 结 论 34 参考文献 35 综 述 41 致 谢 50 个人简介 51 山西医科大学硕士学位论文 灯盏花素改善胰岛素抵抗作用机制网络药理学分析及实验验证 摘 要 目的： 运用网络药理学方法建立灯盏花素改善胰岛素抵抗的 “活性成分-靶点-疾病” 网络，明确靶点相应的生物功能和信号通路，对灯盏花素抗胰岛素抵抗的作用机制进 行科学阐释，筛选可用于其质量评价的功能靶标并进行验证,为后续的研究及其临床 应用奠定实验基础。 方法： 通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP ）结合文献挖掘确定灯盏花素的 主要活性成分，多个数据库联用检索和筛选活性成分对应靶点，构建“活性成分-靶点 -疾病”交互网络，并通过SystemsDock web site 对其进行对接验证，利用生物学信息 注释数据库（DAVID ）结合ClueGO 插件对靶点生物功能及涉及的通路进行关联分析。 基于网络分析结果，我们成功建立了 HepG2 细胞胰岛素抵抗模型，采用葡萄糖氧化 酶法（GOD-POD ）检测灯盏花素对细胞葡萄糖消耗量的影响；油红O 染色观察细胞 形态及胞内脂滴形成情况；以细胞计数试剂盒-8 （CCK-8 ）检测细胞活性；通过qRT- PCR 和Western blot 法观察经灯盏花素处理后胰岛素抵抗HepG2 细胞中PTP1B 、AKT 以及p-AKT 的表达变化。 结果： 经数据库检索及文献查证，灯盏花素主要活性成分为灯盏乙素，网络拓扑分析筛 选出与胰岛素抵抗治疗密切相关的潜在关键靶点4 个（包括NOS3 、PTPN1 、ADORA1 、 PRKCG ），参与代谢调控、炎症反应和细胞呼吸调控等生物过程，通过干预PI3K-Akt 、 Ras 、Insulin resistance 和HIF-1 等相关通路发挥抗胰岛素抵抗作用；体外实验结果显 I 山西医科大学硕士学位论文 示，灯盏花素可以增加胰岛素抵抗 HepG2 细胞模型对葡萄糖的摄取和利用，下调