药物安全性评价实验.docxVIP

安全性评价实验 实验材料及动物 受试物 :五味消毒饮分散片 实验动物 :清洁级昆明小鼠 100 只 急性毒性试验方法 取小鼠 100 只 , 随机分为 10 组, 每组 10 只 , 雌雄各半 , 禁食 12 h 后分别称重。 根据改进寇氏法设 9个剂量组 , 由低到高的组间剂量 比为 0175 :1 , 第Ⅰ～ Ⅸ组的给药剂量分别以 28.88 ,38.51 , 51.34 , 68.46 , 91.28 , 121.70 , 162.27 , 216.36, 和288.48 g·kg- 1 , 以 0.75 稀释等级系数 , 第Ⅰ～ Ⅷ组用蒸馏水稀释成 相等的容量 2.4 mL 灌胃 , Ⅸ组为五味解毒水煎剂原液 2.4 mL 灌胃 , 第Ⅰ～ Ⅸ组的药物配制浓度分别 0. 24 ,0. 32 ,0. 43 ,0. 57 ,0. 76 ,1. 01,1. 35 ,1. 80 ,2. 40 g·mL- 1 0. 每次灌胃体积均为 20 mL·kg- 1 , 每次间隔 4 h ; 第Ⅹ为对照组 , 灌服等量蒸馏水。每天观察记录动物的毒性反应及死亡情况 , 对 死亡动物及时剖检、记录病理变化 , 连续观察 7 d。根据各组小鼠 死亡数 , 再计算 LD50。 亚慢性毒性试验方法 动物分组处理 取小鼠 80只, 随机分为 4 组, 每组 20只, 雌雄各半。Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ组为药物的高、中、低剂量组 , 分别以 LD50的四分之一，十分一，二十五分之一剂量灌胃 , 每次灌胃体积均为 20 mL·kg - 1 ; Ⅳ 组为对照组 , 每日定时灌胃等量蒸馏水。各组连续灌胃 14 d , 停药后 再持续观察 14 d 。 观察指标 临床表现 每天观察小鼠的一般状况 , 每周测定体重变化 情况 , 死亡小鼠及时剖检。 血常规变化 于停药后第 1天和第 14 天, 各组随机抽取 10 只采血 , EDTA二钾盐抗凝 , 立即用 AC·Tdiff2 型全自动血细胞计数分析仪测 定红细胞数、白细胞总数、血小板数和血红蛋白含量。 血清生化值变化 于停药后第 1 天和 14 天, 每组随机抽取 10 只采血, 分离血清 , 用Vitalab Selecctra E 自动生化分析仪测定谷丙转氨 酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐、总蛋白、白蛋白的含量。 病理学变化 于停药后第 1 天每组随机抽取 3只, 停药后第 14 天对剩余所有小鼠剖检 , 采集心、肝、脾、肺、肾、胃和肠 , 固定 , 石蜡切片,HE 染色 , 显微镜下观察病理变化。 通过急性毒性实验， 得出五味消毒饮分散片在相应的剂量中， 未引起小鼠的死亡，可以认为五味消毒饮分散片在剂量范围内未引起毒性反应。 亚慢性毒性实验期间， 观察各组小鼠生长发育是否良好， 各种体征表 现是否正常。五味消毒饮分散片提取物对动物体重、脏器重量、血液 谷丙转氨酶 (ALT) 、谷草转氨酶 (AST) 、尿素氮 (BUN)、肌醉 (Cr) 、血 清白蛋白 (Alb) 和血糖 (Glu) 均有无显著影响。 长期毒性试验 受试物 六个月喂养实验周期较长， 采用灌胃的方式给予受试物会对动物造成 较大损伤，因此考虑将五味解毒分散片加入饲料， 由动物在摄食时摄 入受试物。低、中、高 3个剂量组分别在基础饲料粉中添加 4%、8%和 16%的五味解毒分散片，做成含黄连解毒汤提取物的饲料。 动物分组及剂量设计 80只清洁级昆明小鼠，雌雄各半，随机分为 4组( 正常对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组 ) 。每组雌雄各 10只，分笼喂养。低、中、高三个剂量组分别按 5g/Kg ·Bw、10g/xg ·Bw和20g/Kg·Bw给予受试物。实验处理每周称量一次动物体重，根据体重及给予受试物剂量，精确计算应给予的饲料量， 每天定量给予， 保证所给予的饲料各组动物均能吃完。实验开始后，每天观察并记录动物的一般表现、行为、中毒表现和死亡情况。于实验开始后的第六个月最后一天傍晚禁食， 不禁水，次日早上眼眶取血，分离血清，测定谷丙转氨酶 (ALI ，) 、 谷草转氨酶 (AST) 、尿素氮 (BUN)、肌配 (Cr) 、血清白蛋白 (Alb) 和血 糖(Glu) 。处死动物后，分离器官，测定肝、肾、脾和胸腺的重量。