抵抗素通过LKB1-AMPK信号通路激活内质网应激介导心肌肥厚的机制研究.pdf

目 录 摘 要I Abstract III 常用缩写词中英文对照表 V 前 言 1 1 材料与方法 3 1.1 实验材料 3 1.2 实验方法 6 2 结 果 12 2.1 抵抗素通过内质网应激（ERS ）诱导H9c2 心肌细胞肥大 12 2.2 抵抗素通过LKB1/AMPK 通路介导内质网应激（ERS ）导致心肌肥厚 15 3 讨 论 19 4 结 论 21 参考文献 22 综 述 24 致 谢 34 个人简介 35 山西医科大学硕士学位论文 抵抗素通过LKB1-AMPK 信号通路激活内质网应激 介导心肌肥厚的机制研究 摘 要 目的： 本研究从细胞层面验证抵抗素通过部分抑制 LKB1/AMPK 信号通路，进而促进 内质网应激，介导心肌细胞肥大的分子机制。为心肌肥厚及慢性心力衰竭的防治奠定 理论基础。 方法： 购买H9c2 心肌细胞株，选用含10% 胎牛血清、1% 青链霉素双抗的高糖DMEM 完全培养基，置于含5.6% CO2 、37℃ 恒温细胞培养箱进行培养，等到细胞贴壁后， 5 更换高糖培养基，待细胞生长至培养瓶底70%-80%进行细胞传代。细胞以 10×10 /ml 密度接种于六孔板。实验分成两部分，第一部分共4 组，分别为对照组（Con ）、抵 抗素组50 ng/ml （R ）、抵抗素50 ng/ml + 4-苯基丁酸组1M （R + 4-PBA ）、4-苯基 丁酸组1M（4-PBA 组），细胞饥饿24 h ，分别进行药物作用，24 h 后收集细胞，RT-qPCR 检测细胞肥大相关指标BNF 、β-MHC 表达；Western blot 检测内质网应激相关蛋白表 达GRP78、IRE1/p-IREI 、PERK/p-PERK 表达；第二部分共4 组，分别为对照组（Con ）、 抵抗素组50 ng/ml （R ）、抵抗素50 ng/ml + 二甲双胍组2 mM （R+Met ）、二甲双 胍组2 mM（Met ）。细胞饥饿24 h ，相应药物处理24 h ，western blot 检测p-LKB1/LKB1 、 p-AMPK/AMPK 、p-IRE1/IRE1 、p-PERK/PERK 、GRP78 蛋白表达。 结果： （1）抵抗素处理24 h 后可导致H9c2 心肌细胞表面积增大（P 0.01 ），细胞肥 大胚胎基因BNF 、β-MHC 表达上调（P 0.01 ），蛋白合成量增加（P 0.05 ）。 （2 ）抵抗素处理24 h 与Con 组相比p-PERK 、GRP78 表达明显增高（P 0.01 ）， p-IRE1 增高（P 0.05 ）。4-PBA 预处理2 h 后，p-IRE1 、p-PERK 、GRP78 表达较R 组明显降低（P 0.05 ）。 I 山西医科大学硕士学位论文 （3 ）抵抗素处理24 h 与Con 组相比p-LKB1 、p-AMPK 表达明显降低（P 0.01 ）， p-IRE1 、p-PERK 表达明显增高（P 0.01 ），GRP78 增高（P 0.05 ）；而经二甲双 胍预处理2 h 后，p-LKB1 、p-AMPK 表达较抵抗素组增高（P 0.05 ），p-IRE1 、p-PERK 、 GRP78 表达较抵抗素组明显降低（P 0.05 ）。 结论： ①抵抗素可引起H9c2 心肌细胞肥大；②LKB1/AMPK 途径可能参与了抵抗素介 导的H9c2 心肌细胞肥大；③抵抗素介导的心肌细胞肥大可能与ERS 有关；④抵抗素 可能是通过部分抑制LKB1/AMPK 途径，从而诱导内质网应激最终导致H9c2 心肌细 胞肥厚。 关键