三阴性乳腺癌中M-CSF招募巨噬细胞的机制研究以及筛选影响三阴性乳腺癌预后的基因.pdfVIP

目 录 摘 要I Abstract III 常用缩写词中英文对照表 V 前 言 1 第一部分 TNBC 通过促进巨噬细胞迁移导致其微环境中更多的巨噬细胞浸润 2 1 材料与方法 2 1.1 实验材料、仪器及试剂 2 1.2 免疫组化 6 1.3 细胞培养及条件培养基的收集 6 1.4 Transwell 迁移实验 7 1.5 MTT 实验 7 1.6 划痕实验 8 1.7 明胶酶谱实验 8 1.8 细胞粘附实验 9 1.9 鬼笔环肽染色 9 1.10 实时荧光定量PCR 9 1.11 流式细胞术 11 1.12 数据统计与分析 11 2 结 果 13 2.1 TNBC 中巨噬细胞的浸润多于nTNBC 13 2.2 TNBC 细胞能够促进巨噬细胞迁移 14 2.3 TNBC 通过促进细胞骨架改变导致巨噬细胞迁移能力增强 16 3 讨 论 19 4 结 论 19 4.1 TNBC 中巨噬细胞浸润程度高于nTNBC 19 4.2 TNBC 对巨噬细胞的促迁移能力强于nTNBC 19 4.3 TNBC 能够改变巨噬细胞的细胞骨架 19 第二部分 TNBC 中 M-CSF 通过影响巨噬细胞的骨架重塑导致巨噬细胞迁移能力增 强 20 1 材料与方法 20 1.1 实验材料、仪器及试剂 20 1.2 基因通路富集分析 22 1.3 细胞培养及免疫组化 22 1.4 ELISA 检测 23 1.5 Western blot 23 1.6 划痕实验、鬼笔环肽染色及流式细胞术 24 1.7 小鼠移植瘤模型构建 24 1.8 数据统计与分析 24 2 结 果 25 2.1 TNBC 较nTNBC 分泌更多的M-CSF 25 2.2 M-CSF 是介导TNBC 促进巨噬细胞迁移的关键因素 27 2.3 体内实验证实TNBC 中M-CSF 的表达较高，且巨噬细胞浸润程度较强 29 3 讨 论 31 4 结 论 31 4.1 TNBC 能够分泌更多的M-CSF 31 4.2 M-CSF 是介导TNBC 促进巨噬细胞迁移的关键蛋白 31 4.3 小鼠体内实验证实TNBC 中M-CSF 的表达较高，且巨噬细胞浸润程度较强 31 第三部分 基于生物信息学分析ADAM9 是导致TNBC 预后不良的关键基因 32 1 资料与方法 32 1.1 资料 32 1.2 差异基因统计 32 1.3 通路富集 32 1.4 Kaplan-Meier Plotter 生存分析与GOBO 分析 32 2 结 果 34 2.1 TNBC 中淋巴结转移的发生与锰离子相关通路相关 34 2.2 ADAM9 基因可能是一个促癌基因 35 2.3 ADAM9 仅与TNBC 相关 36 2.4 ADAM9 仅与组织学分级III 级乳腺癌相关 38 3 讨 论 39 4 结 论 39 参考文献 40 综述 43 参考文献 45 致 谢 47 个人简介 48 山西医科大学硕士学位论文 三阴性乳腺癌中M-CSF 招募巨噬细胞的机制研究以及筛选影 响三阴性乳腺癌预后的基因 摘 要 目的： 三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer ，TNBC ）因其侵袭性高、预后差和缺 乏针对性治疗等特点，成为当今乳腺癌的研究热点。肿瘤微环境 （tum