二穗短柄草BdWAR1在生长素与脱落酸信号途径中的功能研究.pdfVIP

符 号 说 明 ABA: Abscisic acid, 脱落酸 Amp: Ampicillin, 氨苄霉素 As: Acetosyringone, 乙酰丁香酮 CIM: Callus-Inducing Medium, 愈伤组织诱导培养基 CTAB: Cetyltrimethylammonium bromide, 十六烷基三乙基溴化铵 DMSO: Dimethyl sulphoxide, 二甲基亚砜 dNTP: Deoxyribonucleoside triphosphat, 脱氧核糖核苷三磷酸 EDTA: Ethylene diaminetetracetic acid, 乙二胺四乙酸 G418: Geneticin, 遗传霉素 Kan: Kanamycin, 卡那霉素 KT: Kinetin, 激动素 NAA: 1-Naphthylacetic acid, 萘乙酸 PI: Propidium iodide, 碘化丙啶 Rif: Rifampicin, 利福平 Spe: Spectinomycin, 壮观霉素 TKCL: Ticarcillin Disodium and Clavulanate Potassium for Injection, 注射用替卡西林钠克 拉维酸钾 WT: Wild type, 野生型 目录 中文摘要 1 Abstract 3 1 前言 5 1.1 模式植物研究现状 5 1.2 二穗短柄草作为模式生物的优势 5 1.2.1 二穗短柄草基因组小 6 1.2.2 二穗短柄草亲缘关系上更接近谷类作物 6 1.2.3 二穗短柄草易遗传转化 7 1.3 二穗短柄草非生物胁迫研究 8 1.4 二穗短柄草根系发育研究 9 1.5 ABA 信号途径 10 1.5.1 ABA 信号转导11 1.5.2 ABA 调控非生物胁迫 12 1.5.3 ABA 介导植物根系发育 13 1.6 生长素信号途径 15 1.6.1 TPL 的主要功能 16 1.6.2 生长素与植物根系发育 17 1.7 生长素与ABA 的相互作用 18 1.8 研究目的与意义 20 2 材料与方法 21 2.1 实验材料 21 2.1.1 植物材料 21 2.1.2 质粒及菌株 21 2.1.3 各种酶及生化试剂 21 2.1.4 菌种及植物培养基配方 21 LB 固体培养基 21 ATS 培养基配方 22 水培培养基配方 22 二穗短柄草组织培养所用培养基配方 23 拟南芥侵染液配方 26 二穗短柄草侵染液配方 26 植物幼苗处理试剂配方 26 激素及试剂配方 26 2.2 实验方法 27 2.2.1 拟南芥的培养 27 2.2.2 植物基因组的提取 27 2.2.3 载体的构建 28 PCR 引物设计 28 目的片段的扩增 28 DNA 产物的回收 29 目的片段与载体的酶切 29 酶切后目的片段与载体的回收 29 目的片段与载体的连接 29 大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备 30 大肠杆菌DH5α 的转化 30 菌落PCR 鉴定转化结果 31 0 质粒DNA 的提取 31 1 质粒DNA 的酶切验证及测序 31 2.2.4 根癌农杆菌GV3101、EHA105 感受态细胞的制备及转化 31 根癌农杆菌GV3101、EHA105 感受态的制备 31 农杆菌转化 32 2.2.5 拟南芥的转化及阳性植株的筛选 32 拟南芥的转化 32 转基因拟南芥阳性苗的筛选 33 2.2.6 植物总RNA 的提取与分析 33 植物总RNA 的提取 33 植物总RNA 的反转录及荧光定量分析 33 2.2.7 烟草的瞬时转化 34 2.2.8 二穗短柄草的转化及阳性克隆的筛选 34 诱导愈伤组织 34 二穗短柄草的侵染 35 二穗短柄草的筛选 35 二穗短柄草分化 35 二穗短柄草生根 35 二穗短柄草移栽 35 二穗短柄草阳性苗鉴定 36 2.2.9 植物激素处理 36 ABA 萌发及返绿实验 36 成苗叶片衰老实验 36 NAA 抑