分子生物学研究法(下).pptxVIP

第六章 分子生物学研究方法(下); 本章主要内容 基因表达研究技术 蛋白质组学及研究技术;1 基因改造技术 （1）体外改造 1）缺失：DNA→限制酶酶切→外切酶Bal 31酶切 →连接酶。 2）点突变：DNA→变性→与突变的引物杂交→聚合反应，连接反应。;;（2）体内改造 基因敲除：是一种基因打靶技术。主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段；也可通过插入突变,使靶基因失活。 1）同源重组 2）非同源重组;?2.1 凝胶阻滞试验（gel retardation assay） 凝胶阻滞试验，又叫作DNA迁移率变动试验（DNA mobility shift assay, EMSA ），是用于体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。在凝胶电泳中，由于电场的作用，裸露的DNA朝正电极移动的距离与其分子量的对数成反比。若此时DNA分子与某种蛋白质相结合，那么，由于分子量增大，它在凝胶中的迁移作用便会受到阻滞，在特定电压和时间内朝正电极移动的距离也就相应缩短了。 当某个DNA片段与细胞提取物混合之后，若它在凝胶电泳中的移动距离变小了，就说明它可能已与提取物中的某种特殊蛋白质分子相结合了。; 凝胶阻滞实验的基本原理图 放射性标记的DNA由于与一