平菇子实体多糖的结构及对D-半乳糖诱导小鼠抗衰老活性分析.pdfVIP

目录 中文摘要 1 ABSTRACT3 1 前言5 1.1 平菇5 1.2 平菇的营养价值5 1.3 食用菌多糖研究6 1.4 食用菌多糖生物活性7 1.4.1 免疫活性7 1.4.2 抗肿瘤活性7 1.4.3 抗氧化活性7 1.4.4 抗炎症活性8 1.4.5 抗衰老活性8 1.5 食用菌多糖的提取方法8 1.5.1 水提醇沉法8 1.5.2 酸、碱浸提法9 1.5.3 酶解法9 1.5.4 超声波和微波辅助法9 1.5.5 超临界CO 流体萃取法10 2 1.6 衰老10 1.7 食用菌多糖与抗衰老11 1.8 本研究的目的及意义11 2 材料与方法12 2.1 试验材料12 2.2 主要试剂与仪器设备12 2.2.1 主要试剂12 2.2.2 仪器设备13 2.3 方法14 2.3.1 平菇子实体多糖提取14 2.3.2 平菇子实体多糖的分离纯化15 2.3.2.1 除蛋白：Sevag 法15 2.3.2.2 除色素：H O 法15 2 2 2.3.2.3 葡聚糖凝胶柱层析15 2.3.2.4 透析16 2.3.3 苯酚-硫酸法测定平菇多糖含量16 2.3.4 试验动物17 2.3.5 动物分组17 2.3.6 平菇子实体多糖体内抗氧化活性18 2.3.6.1 超氧化物歧化酶 （SOD）测定18 2.3.6.2 丙二醛 （MDA）19 2.3.7 平菇子实体多糖体内抗炎症活性20 2.3.7.1Trizol 法进行脑和肝组织mRNA 的提取20 2.3.7.2mRNA 逆转录为cDNA21 2.3.7.3 实时荧光定量PCR （Real-timequantitativePCR，qRT-PCR）22 2.3.8 平菇子实体多糖体内抗凋亡试验22 2.3.8.1Western 检测脑组织Bax,Caspase-3 和Bcl-2 表达22 2.3.8.2 脑和肝组织Bax,和Bcl-2 荧光切片观察24 2.3.9 病理学切片观察25 2.3.10 平菇子实体多糖结构分析26 2.3.10.1 气相色谱 （GC）单糖组成测定26 2.3.10.2 多糖样品的FT-IR 分析27 2.3.10.3 多糖核磁共振分析27 2.3.11 数据处理28 3 结果与分析28 3.1 平菇子实体多糖体内抗氧化分析28 3.1.1 脑和肝组织超氧化物歧化酶 （SOD）测定28 3.1.2 脑和肝组织丙二醛 （MDA）含量测定29 3.2 平菇子实体多糖体内抗炎症分析31 3.2.1PP 对脑和肝脏组织TNF-αmRNA 表达的影响31 3.2.2PP 对脑和肝脏组织IL-6mRNA 表达的影响32 3.2.3PP 对脑和肝脏组织IL-1βmRNA 表达的影响34 3.3PP D- 35 对 半乳糖诱导的衰老小鼠的抗凋亡分析 3.3.1 小鼠脑中凋亡蛋白Bax,Caspase-3 以及抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达35 3.3.2 海马中凋亡蛋白Bax 以及抗凋亡蛋白Bcl-2 免疫切片的观察36 3.3.3 肝脏组织中凋亡蛋白Bax 以及抗凋亡蛋白Bcl-2 免疫切片的观察37 3.4PP D- 39 对 半乳糖诱导衰老小鼠的病理学影响 3.4.1 脑和肝脏组织病理学切片观察39 3.4.2 结肠组织病理学切片观察39 3.5 平菇子实体多糖结构40 3.5.1 单糖组成40 3.5.2 红外光谱41 3.5.3PP 的核磁共振图谱42 4 讨论43 4.1 平菇多糖的提取及分离纯化43 4.2 多糖与抗衰老43 4.3 多糖的抗氧化能力44 4.4 平菇子实体多糖的抗炎症功能44 4.5 平菇子实体多糖抗凋亡能力45 4.6 病理学切片分析45 4.7 平菇子实体多糖的结构46 5 结论46 6下一步工作47 参考文献49 致 谢54 山东农业大学硕士学位论文