拟南芥FRS6和FRS8调控下胚轴伸长的分子机制.pdfVIP

缩 略 词 说 明 DMSO:Dimethyl sulphoxide, 二甲基亚砜 FRS:FAR1-related sequences,FAR1 相关序列 GUS:β-glucuronidase, β-葡萄糖苷酸酶 GA:Gibberellin, 赤霉素 GA20OX:GA20-oxidases，GA20氧化酶 IAA:Indole-3-aceticacid, 吲哚乙酸 LUC:Luciferase, 荧光素酶报告基因 NPA: 1-N-naphthylphthalamic acid, 1-N-萘基邻氨甲酰苯甲酸 PHY:Phytochrome, 光敏色素 PAC:Paclobutrazol, 多效唑 RNaseA:RibonucleaseA, 核糖核酸酶A RT-qPCR:RealtimequantitativePCR, 实时定量PCR X-α-gal:5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-α-D-galactoside,5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷 X-gal:5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactoside,5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 目录 中文摘要1 Abstract3 1 前言5 1.1FRS 蛋白家族5 1.1.1FRS 蛋白家族概述5 1.1.2FRS 蛋白家族结构和DNA 结合活性分析5 1.1.3FRS 蛋白家族的定位及表达分析6 1.1.4FRS 蛋白家族功能7 参与植物光信号转导7 参与叶绿体分裂以及叶绿素合成7 影响植物开花时间和生长发育8 参与脱落酸信号转导途径9 参与淀粉合成和淀粉颗粒形成9 参与芽顶端分生组织和花的发育9 参与其他途径10 1.2 下胚轴生长调控机制10 1.2.1光对植物下胚轴的调控10 phyA 介导远红光对下胚轴的调控11 phyB 介导红光对下胚轴的调控12 蓝光对下胚轴的调控12 1.2.2 植物激素对下胚轴的调控13 生长素调控下胚轴伸长过程13 赤霉素调控下胚轴伸长过程13 1.3HDA15 的相关研究15 1.4 本研究的目的和意义2 2 材料与方法3 2.1材料3 2.1.1植物材料及生长条件3 2.1.2 载体与菌株3 2.1.3 酶和各种生化试剂3 2.1.4PCR 引物3 2.2 实验方法7 2.2.1培养基7 2.2.2 载体构建7 植物总RNA 的提取7 合成cDNA 的第一条链8 获取目的片段8 目的片段与载体连接9 连接产物转化大肠杆菌9 提取大肠杆菌质粒DNA10 2.2.3花序浸染法转化拟南芥10 制备农杆菌GV3101感受态细胞11 冻融法转化农杆菌感受态细胞11 利用农杆菌浸染拟南芥花序11 2.2.4 拟南芥种子的消毒和灭菌12 2.2.5植物基因组DNA 提取12 2.2.6T-DNA 插入突变体纯杂合鉴定13 2.2.7GUS染色13 2.2.8原生质体瞬时转化实验13 2.2.9双荧光素酶互补实验15 质粒转化农杆感受态15 烟草瞬时转化实验16 2.2.10 蛋白免疫沉淀16 提取蛋白16 聚丙烯酰胺凝胶电泳17 免疫印迹17 2.2.11酵母单杂交17 酵母感受态制备17 诱饵载体转化酵母感受态18 β-半乳糖苷酶活性测定 18 2.2.12 酵母双杂交筛库19 酵母双杂交筛选19 酵母双杂交验证20 3 结果与分析21 3.1FRS6和FRS8 时空表达的特异性分析21 3.1.1FRS6和FRS8 的亚细胞定位21 3.1.2FRS6和FRS8 的组织表达21 3.2FRS6和FRS8过表达及突变体株系的获得22 3.2.1frs6和frs8 突变体的获得及鉴定22 3.2.2FRS6 的过量表达株系的获得23 3.3FRS6和FRS8在拟南芥中的表达24 3.3.1FRS6和FRS8在转录水平的表达24 3.3.2FRS6 蛋白水平的表达25 3.4FRS6和FRS8 参与调控拟南芥下胚轴伸长26 3.4.1FRS6和FRS8促进下胚轴伸长26 3.4.2 不同光质下各株系下胚轴表型27 3.4.3FRS6 与FRS8相互作用28 3.4.4FRS6和FRS8共定位于细胞核29 3.4.5FRS6和FRS8与红光受体phyB 的关系30 3