利用短柄草T-DNA插入突变体库筛选鉴定小麦赤霉病抗性相关基因.pdfVIP

符 号 说 明 ABA: Abscisic acid, 脱落酸 Bp: Base pair, 碱基对 CTAB: Cetyltrimethylammonium bromide, 十六烷基三甲基溴化铵 EDTA: Ethylene diamine tetraacetic acid, 乙二胺四乙酸 ET: Ethylene, 乙烯 F. g : Fusarium graminearum, 禾谷镰刀菌 FHB: Fusarium head blight, 赤霉病 GO: Gene Ontology, 基因本体 GFP: Green fluorescent protein, 绿色荧光蛋白 IPCR: Inverse-PCR, 反向PCR JA: Jasmonic Acid, 茉莉酸 KEGG: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, 京都基因与基因组百科全书 LB: Luria-bertani medium, LB 培养基 NPR : Nonexpressor of PR gene, 病程相关蛋白非表达子 PCR: Polymerase chain reaction, 聚合酶链式反应 PDA: Potato dextrose agar, 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 POD: Peroxidase, 过氧化物酶 PR: Pathogenesis Related Protein, 病程相关蛋白 QTL: Quantitative Trait Locus, 数量性状座位 ROS: Reactive Oxygen Species, 活性氧 SA: Salicylic Acid, 水杨酸 SAR: Systemic Acquired Resistance, 系统获得性抗性 Tail-PCR: Thermal Asymmetric Interlaced PCR, 热不对称交错PCR T-DNA: Transfer DNA, 转移DNA 目 录 中文摘要I 英文摘要 III 1 引言 1 1.1 小麦赤霉病概况 1 1.1.1 小麦赤霉病的病害特征 1 1.1.2 小麦赤霉病的抗病类型 2 1.1.3 小麦赤霉病抗病机制研究进展 2 1.1.4 分子水平抗赤霉病机理的研究进展 5 1.1.5 抗赤霉病QTL 研究 7 1.2 二穗短柄草研究现状 11 1.2.1 二穗短柄草的生物学特性 11 1.2.2 二穗短柄草的基因组学研究 12 1.3 T-DNA 插入突变体 12 1.4 全基因组重测序技术研究进展 13 1.5 本研究的目的意义 14 2 材料与方法 15 2.1 材料 15 2.1.1 植物材料 15 2.1.2 试验地点 15 2.1.3 菌株与质粒 15 2.1.3 酶及生化试剂 15 2.1.5 PCR 引物 15 2.1.6 主要溶液和培养基配制 15 2.1.7 主要仪器 16 2.2 方法 16 2.2.1 禾谷镰刀菌的培养及短柄草对禾谷镰刀菌的抗性鉴定 16 禾谷镰刀菌的培养 16 离体叶片鉴定短柄草对禾谷镰刀菌的抗性 16 单花滴注鉴定短柄草对禾谷镰刀菌的抗性 16 2.2.2 DNA 提取 17 DNA 提取步骤 17 CTAB 试剂的配制 18 琼脂糖凝胶电泳相关溶液配制及流程 18 2.2.3 反向PCR 鉴定侧翼序列 18 基因组酶切反应 18 T4 连接酶连接 19 巢式PCR 扩增 19 目的核酸片段的纯化回收 20 回收产物与T 载体连接 20 热激法转化E.coli 感受态细胞 20 普通质粒小量提取 20 2.2.4 短柄草基因组重测序 20 2.2.5 基因组数据比对 21 3 结果与分析 22 3.1 短柄草高通量离体叶片赤霉病筛选体系的建立 22 3.2 短柄草T-DNA 插入突变体表型分离 22 3.3 短柄草T-DNA 插入突变体禾谷镰刀菌抗性筛选鉴定 24 3.4 反向PCR 鉴定T-DNA 侧翼序列 25 3.5 感病突变体全基因组重测序分析 25 3.5.1 插入片段位置分析 26 3.5.2 基因序列验证 27 3.5.3 基因功能分析 27 4 讨论 29 4.1 短柄草T-DNA 插入突变体库的应用 29 4.2 短