尼罗罗非鱼jarid2基因的克隆鉴定及高温诱导对其表达变化的影响研究.pdfVIP

符号说明 ESD: Environmentally-dependent Sex Determination ，环境依赖型性别决定 GSD: Genotypic Sex Determination ，基因型性别决定 TSD: Temperature-dependent Sex Determination ，温度依赖型性别决定 DAB: Diaminobenzidine ，二氨基联苯胺 cDNA: complementary DNA ，互补DNA PCR: Polymerase Chain Reaction ，聚合酶链式反应 TSP: Thermosensitive Period ，热敏期 PGC: Primordial germ cells ，原始生殖细胞 HE: Hematoxylin-eosin staining ，苏木精-伊红染色 SDS: Sodium dodecyl sulfate ，十二烷基磺酸钠 qRT-PCR ：Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction ，实时荧光定量 PCR IHC: Immunohistochemistry ，免疫组织化学 dpf: Days after fertilization ，受精后天数 dph: days post hatching ，仔鱼破膜天数 目 录 中文摘要 I Abstract III 1 前言 1 1.1 鱼类性别决定方式 1 1.1.1 基因型性别决定 2 1.1.2 环境依赖型性别决定 2 1.1.3 基因-环境依赖型性别决定 2 1.2 尼罗罗非鱼的简述 3 1.2.1 尼罗罗非鱼的外部形态发育 3 1.2.2 尼罗罗非鱼的性腺发育 4 1.2.3 尼罗罗非鱼的性别决定机制 5 1.3 鱼类的性别分化 5 1.4 表观遗传学在性别分化中的作用 6 1.5Jarid2 基因的概况及研究现状 6 1.6 研究目的与意义 7 2 材料与方法 8 2.1 试验材料 8 2.1.1 试验组的建立 8 2.1.2 样品的收集 9 2.2 试验试剂仪器 9 2.2.1 试验仪器 9 2.2.2 试验的试剂及来源 9 2.3 试验方法 12 2.3.1 提取尼罗罗非鱼DNA 12 2.3.2 聚合酶链式反应（PCR ） 13 2.3.3 琼脂糖凝胶回收 13 2.3.4 连接转化 14 2.3.5 Western Blot 15 2.3.6 尼罗罗非鱼的性腺石蜡切片的制备 17 2.3.7 免疫组化检测尼罗罗非鱼性腺蛋白表达 18 2.3.8 RNA 的提取 20 2.3.9 qRT-PCR 检测Jarid2 的表达量 20 2.4 主要数据库及软件 21 3 结果与分析 21 3.1 尼罗罗非鱼DNA 的提取及雌雄鉴定 22 3.2 通过性别连锁分子标记鉴定雌雄 22 3.3 尼罗罗非鱼Jarid2 基因序列的检测 22 3.4 高温诱导后尼罗罗非鱼Jarid2 的表达变化 23 3.5 尼罗罗非鱼各组织Jarid2 的表达 24 3.6 尼罗罗非鱼不同处理组之间Jarid2 的表达 25 4 讨论 26 4.1 表观遗传修饰在鱼类性别分化中的作用 26 4.2 高温诱导对尼罗罗非鱼性腺分化的影响 27 4.3 高温处理对尼罗罗非鱼Jarid2 表达的影响 27 5 结论 28 参考文献 29 致谢 41 山东农业大学硕士专业学位论文 中文摘要 低等脊椎动物的性别决定方式主要包括三种：基因型性别决定（GSD ）、环 境依赖型性别决定 （ESD ）、基因-环境依赖型性别决定 （GSD+ESD ），其中环 境依赖型性别决定中温度的影响较为关键，又称之为温度依赖型性别决定 （TSD ）。在温度依赖型性别决定中，对爬行动物的研究较深入，但对鱼类方面 的研究较少。有研究发现温度是鱼类性别决定中影响最大且最关键的一类环境因 素，很多鱼类都属于基因-温度依赖型性别决定（GSD+TSD ）类型，其中尼罗罗 非鱼的性别决定就属于这种性别决定方式，它不仅受基因的控制，还受温度的影 响。 尼罗罗非鱼是我国出口量最大