两相代谢修饰对姜黄素及6-姜酚保护PC12细胞抗氧化损伤作用的影响研究.pdfVIP

符号说明 RPMI1640：RoswellPark MemorialInstitute，1640培养基 FBS：Fetalbovine serum，胎牛血清 DMSO Dimethyl sulfoxide ： ，二甲基亚砜 MTT：3- （4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazoliumbromide, 噻唑蓝 （商品名） PBS Phosphatebuffered saline ： ，磷酸盐缓冲液 SOD Superoxidedismutase ： ，超氧化物歧化酶 MDA：Malondialdehyde，脂质过氧化物 qRT-PCR：Quantitativereal-timereverse-transcription, 实时定量反转录聚合酶链反应 Western Blot：蛋白质印迹法 PCR：Polymerasechain reaction，聚合酶链式反应 Nrf2 Nuclear factor-erythroid-2-relatedfactor2 E2 2 ： ，转录因子 相关因子 HO-1：Hemeoxygenase 1，血红素加氧酶1 NQO1：NAD （P）H quinonedehydrogenase 1， NAD （P）H 醌脱氢酶1 Keap1：Kelch likeECH associatedprotein 1，KELCH 样 ECH 关联蛋白1 目 录 中 文 摘 要I AbstractIII 1.前言 1 1.1 姜黄素、6-姜酚与氧化损伤1 1.2 姜黄素、6-姜酚的两相代谢产物研究进展2 1.3酚类物质两相代谢产物抗氧化损伤作用的研究进展3 1.3.1姜黄素、6-姜酚两相代谢产物的抗氧化损伤作用3 1.3.2 其他多酚类两相代谢修饰物的抗氧化损伤作用4 1.4Nrf2-Keap1信号通路与氧化损伤4 1.5H O 诱导的PC12 细胞氧化损伤模型5 2 2 1.6本研究的目的及意义5 1.7研究内容6 1.7.1PC12 细胞氧化损伤模型的建立6 1.7.2 姜黄素、6-姜酚及它们的两相代谢修饰物保护细胞抗氧化损伤作用6 1.7.3姜黄素、6-姜酚及它们的代谢产物对氧化损伤细胞抗氧化酶的影响6 1.7.4 姜黄素、6-姜酚及它们的代谢产物对Nrf2-Keap1通路的调控作用6 2.材料与方法6 2.1实验材料7 2.2 仪器设备7 2.3 试验主要试剂8 2.4 实验方法8 2.4.1细胞培养及传代8 2.4.2MTT 实验9 2.4.3细胞中乳酸脱氢酶 （LDH）释放量的测定9 2.4.4 ROS 10 细胞中活性氧 （ ）的测定 2.4.5细胞超氧化物歧化酶 （SOD）活性的测定10 2.4.6 MDA 11 细胞脂质过氧化物 （ ）含量的测定 2.4.7 实时荧光定量PCR 实验12 2.4.8siRNA 转染 13 2.4.9Western Blot 实验13 2.4.10 统计学分析14 3. 结果与分析 15 3.1PC12 细胞H O 损伤模型的建立15 2 2 3.2 生姜活性成分对PC12 细胞的毒性效应15 3.2.1姜黄素及其代谢产物对PC12 细胞的毒性效应15 3.2.2 6-姜酚及其代谢产物对PC12 细胞的毒性效应16 3.3生姜活性成分对PC12 细胞氧化损伤的保护作用17 3.3.1生姜活性成分对H O 损伤的PC12 细胞存活率的影响17 2 2 3.3.2 生姜活性成分对H O 损伤的PC12 细胞乳酸脱氢酶 （LDH）释放的影响 19 2 2 3.3.3