禾谷镰刀菌磷脂酰丝氨酸脱羧酶的功能研究.pdfVIP

符号说明 + Amp :Ampicillin, 氨苄青霉素 CA:Carrot agar, 胡萝 卜培养基 cDNA:complementary DNA, 互补脱氧核糖核酸 CM:Completemedium, 完全培养基 CMC:Carboxymethyl cellulose, 羧甲基纤维素 CTAB:Hexadecyltrimethyl ammoniumbromide, 十六烷基三甲基溴化铵 DEPC:Diethylpyrocarbonate, 焦碳酸二乙酯 DNA:Deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸 DON:Deoxynivalenol, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 Etn:Ethanolamine, 乙醇胺 FHB:Fusariumheadblight, 小麦赤霉病 GAPDH:Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase, 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 G418:Geneticin, 遗传霉素 H O :Hydrogenperoxide, 过氧化氢 2 2 LB:Luria-bertanimedium,LB 培养基 PSD:PhosphatidylserineDecarboxylase, 磷脂酰丝氨酸脱羧酶 PDA:Potatodextroseagar, 马铃薯培养基 PEG:Polyethylene glycol, 聚乙二醇 PA:Phosphatidicacid, 磷脂酸 PI:Propidium iodide, 碘化丙啶 PS:Phosphatidylserine, 磷脂酰丝氨酸 PE:Phosphatidylethanolamine, 磷脂酰乙醇胺 PC:Phosphatidylcholine, 磷脂酰胆碱 qRT-PCR:Quantitivereal-timepolymerasechain reaction, 实时荧光定量PCR RT-PCR:Reversetranscriptasepolymerasechainreaction, 反转录PCR RNA:Ribonucleic acid, 核糖核酸 RnaseA:RibonucleaseA, 核糖核酸酶A SDS:Sodium dodecyl sulfate, 十二烷基硫酸钠 目录 中文摘要I 英文摘要III 1 前言1 1.1 禾谷镰刀菌概述1 1.1.1小麦赤霉病1 小麦赤霉病症状及病害循环1 小麦赤霉病防治措施2 1.1.2 禾谷镰刀菌3 禾谷镰刀菌的生物学特征3 禾谷镰刀菌真菌毒素3 禾谷镰刀菌研究进展4 1.2 磷脂酰乙醇胺的合成与磷脂酰丝氨酸脱羧酶5 1.2.1 磷脂酰乙醇胺的生物合成途径5 1.2.2 磷脂酰丝氨酸脱羧酶简介6 磷脂酰丝氨酸脱羧酶6 磷脂酰丝氨酸脱羧酶研究进展7 1.3 研究目的和意义7 2 材料和方法8 2.1 实验材料8 2.1.1 主要软件和数据库8 主要软件工具8 主要数据库8 2.1.2 菌株和载体8 2.1.3 工具酶和主要试剂8 2.1.4 主要培养基配方9 2.1.5 主要溶液和缓冲液配方13 2.2 实验方法17 2.2.1 禾谷镰刀菌磷脂酰丝氨酸脱羧酶(PSD)的生物信息学分析17 2.2.2 禾谷镰刀菌的保存与活化17 2.2.3 禾谷镰刀菌基因组DNA 的提取17 2.2.4 禾谷镰刀菌基因组RNA 的提取以及cDNA 的获得18 禾谷镰刀菌基因组RNA 的提取18 cDNA 的获得19 2.2.5 禾谷镰刀菌FgPSD 基因敲除片段的构建20 敲除片段的扩增20 敲除片段的连接21 2.2.6 原生质体的制备与转化22 2.2.7PCR 验证敲除转化子23 2.2.8Southernblot 验证敲除转化子24 2.2.9 禾谷镰刀菌FgPSD2 回复和基因定位菌株的构造和验证24 禾谷镰刀菌FgPSD2 回复和定位载体的构建24 FgPSD2-C 回复菌株的获得26 FgPSD1-GFP 定位菌株的获得及定位观察26 FgPSD2-GFP 定位菌株的获得及定位观察26 2.2.10 禾谷镰刀菌FgPSD2 基因敲除突变体表型分析27 菌丝形态状况观察27 菌丝高度生长状况观察27 分生孢子产量的测定与观察27 分生孢子萌发状况观察27 有性生殖表型观察28