植物生理学试验zc.ppt

返回 31 四 . 实验装置 取 500ml 广口瓶一个，配置一个三孔橡皮塞，其 中一孔插入装有碱石灰的干燥管，以吸收空气 中的 CO 2 ，保证进入广口瓶的空气无 CO 2 ，一 孔插入温度计，另一孔 ( 直径约 1cm 左右 ) 供插 滴定管，未插滴定管前用小橡皮塞塞紧。瓶塞 下面挂一尼龙网制小篮，供装实验材料。 返回 32 五 . 实验步骤 1. 称取材料 10-15g ，装于小篮内，将小篮子固定在橡皮塞上，同时向广口 瓶中加 0.05mol/L Ba(OH) 2 溶液 20ml ，立即塞紧瓶塞。实验途中每 5 min 左 右轻轻地摇动广口瓶一次，破坏溶液表面的 BaCO 3 薄膜 , 以利对 CO 2 的吸收。 2. 另按上述方法 ( 不放材料 ) 作同样测定，作为实验对照。 3. 30-60 min 后，小心打开瓶塞，迅速取出小篮子，加入 1-2 滴酚酞指示剂， 立即重新塞紧瓶塞。然后拔出插在滴定管孔口的小橡皮塞，将 滴定管插入 孔中，用 1/44mol/L 的 H 2 C 2 O 4 滴定，直到红色转变成无色为终点 ( 若 30 秒钟 内 溶液又变为红色，可补加 1 滴 H 2 C 2 O 4 , 记录滴定所耗用的 H 2 C 2 O 4 溶液的体 积 (ml 数 ) 。 六 实验结果 按每消耗 1ml H 2 C 2 O 4 溶液相当于 1mgCO 2 计算材料在呼吸放出 CO 2 的 mg 数。 计算公式： 呼吸强度 (CO 2 mg/gFw· h)= 式中 : V 0 为空白对照所耗用 H 2 C 2 O 4 的体积（ ml ） V 1 为材料所耗用 H 2 C 2 O 4 的体积（ ml ） M- 草酸摩尔浓度 E CO 2 -CO 2 的摩尔质量 七 . 实验结果分析和讨论 1. 测定呼吸速率有何意义 (V 0 — V 1 )M.E CO 2 W(g) × t(h) 下次实验 : POD 活性测定 返回 33 实验十二 过氧化物酶活性的测定 一 . 实验目的意义 掌握分光光度计测定 POD 的方法和酶活力的表示方法。 二 . 实验原理 POD 广泛存在植物体中、是呼吸作用过程中一个重要的 末端氧化酶，在细胞质中起 IAA 氧化酶的作用，在植物生 长发育的整个过程中，其活性不断发生变化，因此测定 POD 的活性，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。 在 H 2 O 2 存在下， POD 催化愈创木酚氧化成茶褐色的产 物，生成物在 470nm 处有最大吸收，通过测定生成物的含 量，可计算出 POD 活力。 三 . 实验材料 返回 34 四 . 操作步骤 1. 称取植物材料 ( 土豆、小白菜等 )0.5g ，加 0.1mol · L -1 tris-HCl 缓 冲液 (PH8.5) 5m1 ，于研钵中研磨成匀浆，于 4000rpm 下离心 15min ，倾出上清液 ( 必要时，残渣再用 5ml 缓冲液提取一次，合 并两次上清液 ) ，贮存于冷处 (0~5 ℃ ) ，备用。 2. 取光径 1cm 比色杯 2 只，于 1 只比色杯加入上述酶液 1ml( 如酶活性 过高可稀释之，土豆约稀释 5 倍 ) ，再加入 反应混合液 3ml ，立即开 启秒表记录时间，另取一只比色杯并加入 0.2mol · L -1 磷酸缓冲液 (PH6.0) 校零，于波长 470nm 测量吸光度，一般测定反应 0~3min 或 0~5min 内的光密度值，取其平均值计算。 五 . 结果计算 以每 min 内 OD 470 变化 0.01 为一个酶活力单位 (U) 计算 POD 的活力。 计算公式：