微生物资源讲义——第三章.pptVIP

(九)菌种保藏 对于无论用什么方法所获得的酶高产菌株，都必须对其进行有效的菌种保藏。这是因为在人工培养条件下，任何微生物菌株通过一系列的传代接种后，都可能发生菌种的退化，使得菌种的一个或多个特性逐步消失，最终导致营养细胞的死亡。常见的菌种保藏有以下一些方法： 斜面菌种4℃低温保藏 该方法只能作为菌种的短期保藏。一般有泡子的霉菌或放线菌及有芽抱的细菌可以保存4 9个月，酵母菌大约4个月，细菌2个月左右。 液体石蜡油保藏 此法是采用灭菌的液体石蜡油覆盖在菌种斜面上(高出斜面1.5 cm以达到隔绝空气进行保护的目的。用此法保藏时间在1年以上。霉菌、酵母菌、细菌及放线菌均可采用液体石蜡保藏法。 沙土管保藏法 其基本过程就是将沙子(60%的沙+40%的土)过60目筛，用10%的盐酸浸泡2h，水洗至中性晒干，转入小安培瓶或小试管内灭菌。然后将培养好的保存对象移人沙土管内，干燥处理后，低温保藏即可。此法适用于保藏放线菌、芽孢杆菌和霉菌。保存时间1年至数年。为保证保藏质量，最好能1年转代1次。 冷冻保藏法此法是在低温下将细胞置于脱脂牛奶中，并快速冷冻使细胞保持完整。然后用真空干燥法使微生物的生长和一切酶的作用都暂时停止。用该法来保藏微生物菌株，保藏期可达5-10年。 三、实验室操作与工业化生产之间的差别 实验室小规模操作与工业化大规模生产微生物酶的一般原理是相同的，但两者在可能遇到的问题及操作要求和方法上，通常有很大差异： (1)、用摇瓶来培养微生物时，在培养过程中很容易保持无杂菌污染状态，而在工业发酵过程中，防止污染却是一项经常性任务，因为污染源往往是多方面的，如搅拌器轴封漏气、冷却盘管漏水或阀门及空气无菌过滤器出现无菌状态不严格等，都会导致在发酵过程中的杂菌污染。 (2)、与工业化生产不同，实验室水平上的微生物发酵往往需要更长的时间。一般说来，根据菌种和所需目的酶的不同，实验室规模的发酵时间通常为2-14天，而工业化生产则只需12h至6天。另外，在实验室进行操作时，由子培养液的体积小，一旦方法确定，几小时内就可将酶提取出来，但对大型发酵而言，遇到最大难题，往往不会出现在发酵阶段，而是在随后的酶提取时期，即发酵液的后处理阶段。 (3)、实验室条件下的摇瓶试验甚至是微型发酵罐的发酵经验，对于大型的工业化发酵生产来说所能提供的参考价值也是很有限的，因此，在任何一家工厂的规模发酵过程中(包括生产目的酶的中型试验)，为了获得最佳目的酶产量，一些重要的发酵参数，如搅拌转速、通气量、功率输人等都必须依靠操作入员的经验来确定。 第三节 微生物酶的应用 用微生物生产的商业化酶已有百余种。但产量大、应用广、经济效益高的酶品种主要是各种分解酶。另外，基因工程工具酶日新月异的进步也从根本上改变了人们的生活。 一、蛋白酶 从经济学的角度看，蛋白酶要算是最重要的一类工业酶了。在当代，商业化蛋白酶的应用主要集中在去污剂工业。在该领域，碱性丝氨酸蛋白酶被广泛使用。此外，毛霉蛋白酶在乳酪制造业中所起的作用也不容忽视。从市场占有率看，蛋白酶约占整个商品酶销售量的40%。 二、芳基乙醚酶 木质素是纤维素发酵后的主要副产品。全世界陆生生物量中木质纤维占了95%，其中木质素又占1/4左右。科学家们通过遗传工程方法将欧文氏菌编码的芳基乙醚酶基因克隆到大肠杆菌内，后者即可大量分泌能降解木质素的芳基乙醚酶。木质素经过该酶降解后能转换出有用的高档药品、染料、能源及生物降解塑料聚羟丁酯的原料。这样既可消除污染，又创造了财富，可谓一举两得。 * * 第三章 微生物酶 第一节 概述 酶是活细胞产生的一种生物催化剂。在酶的参与下，生物体内的新陈代谢才能有序进行。尽管人类在19世纪前后才建立起酶的概念，但酶的催化作用却很早就为人们的生活所利用。 在人类游牧生活时期，就已会利用动物的胃液来凝固牛乳。 人类在4000多年前就已掌握的酿酒和制酱技术其实也是酶作用的结果。 1897年以后，Buchner二发现酶的细胞外作用现象，从而导致了酶的商品化生产、最初的商品酶制剂主要以动植物为原料提取，如从牛胃中提取凝乳酶、从胰脏中提取胰酶、从血液中提取凝血酶及从植物材料中提取淀粉酶等。之后，Takamiine利用霉菌来生产淀粉酶使得酶制剂工业取得突破。其方法甚至在今天仍被采用。第二次世界大战以后，随着微生物培养技术、发酵工艺和设备的日臻完善，利用微生物来获得商品化酶制剂已形成规模化产业，并开辟了广阔的市场。 20世纪90年代以后，随着基因工程的广泛介入，一些原来只能由动物或植物生产的酶，经过酶基因重组，可以在微生物上得到表达。由于在发酵过程中很容易对微