细菌革兰氏染色和形态观察.pptVIP

实验一细菌的革兰氏染色和 形态观察  球菌 staphylococci taphylocpcch 杆菌  弧菌  实验一细菌的革兰氏染色和形态 观察 实验目的 1、掌握无菌操作技术和细菌抹片的制备方法 ·2、学习掌握单染色的操作技术 ·3、了解革兰氏染色机理,并掌握其操作技术 4、熟悉显微镜的使用、学习并掌握油镜的原 理和使用方法  实验原理--简单染色 细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识别 必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色,使 经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地 观察到其形态和结构。此法操作简便,适用于菌体一般形 状和细菌排列的观察 常用碱性染料进行简单染色,这是因为在中性、碱性或弱 酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离 时,其分子的染色部分带正电荷,因此碱性染料的染色部 分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与 背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别。常用作简 的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解 酸使培养基p下降时,细菌所带正电荷增加,此时 用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色  二、实验原理--简单染色 ·染色前必须固定细菌。其目的有二:一是杀 死细菌并使菌体粘附于玻片上;二是增加其 对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定 两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形  二、实验原理--革兰氏染色 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 Chris tangram氏创立的,革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和 革兰氏阴性菌(G-)两大类。革兰氏染色法 是细菌学中最重要的鉴别染色法 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性 和革兰氏阴性,是由这两类细菌细胞壁的结 构和组成不同决定的。  附:部分细菌的革兰氏染色谱 微生物 染色反应 革兰氏阳性(G+) 革兰氏阴性(G-) 葡萄球菌 脑膜炎双球菌 球菌 链球菌 肺炎球菌 淋病双球菌 四联球菌 卡他球菌 大肠杆菌 沙门氏杆菌 痢疾杆菌 白喉杆菌 变形杆菌 杆菌 耐酸性杆菌 绿脓杆菌 芽孢杆菌 嗜血性杆菌 梭状芽孢杆菌 布鲁氏杆菌 巴氏杆菌 马鼻疽杆菌 克雷伯氏菌 其他 放线菌 弧菌 真菌 螺旋体  二、实验原理--革兰氏染色 革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂 晶紫进行初染,再用碘液媒染,然后用乙醇 (或丙酮)脱色,最后用复染剂(如番红)复染 经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色的 细菌为革兰氏阳性菌;如果细胞中初染剂被 脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红 色),该菌属于革兰氏阴性菌。  、实验原理--革兰氏染色 当用结晶紫初染后,像简单染色法一样,所有细菌都被 成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成 结晶紫一碘的复合物,从而增强了染料与细菌的结合力 当用脱色剂处理时,两类细菌的脱色效果是不同的。革兰 氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成, 壁厚、类脂质含量低,用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、 使肽聚糖层的网状结构孔径缩小,透性降低,从而使结晶 紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内,经脱色和复染 后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同,由于其 细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高,所以当脱色处理时, 类脂质被乙醇(或丙酮)溶解,细胞壁透性增大,使结晶紫 碘的复合物比较容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞 卫复染剂的红色。