基因工程(第二章答案).docxVIP

第二章 基因工程工具酶 一、解释下列名词 1.Restriction and modification （限制与修饰） 宿主特异性地降解外源遗传物质 （ DNA ） 的现象称为限制。外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。 Matched ends(or cohesive end) （匹配末端或粘性末端）识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即粘性末端 3. Blunt ends 平末端。在回文对称轴上同时切割 DNA 的两条链，产生的没有碱基突出 的末端称为平末端。 Star activity 星星活性。 在极端非标准条件下， 限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。 5. Klenow fragment Klenow 片段。 Klenow DNA 酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5--3  聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3--5  外切活性不受影响。 6.Reverse transcriptase 成 DNA 活性，但是无  反转录酶。即依赖于 3--5 外切活性。  RNA  的  DNA  聚合酶，它有  5--3  合 7.Terminal transferase  （末端转移酶） 8.Ligase  连接酶。 催化  DNA 5  磷酸基与  3  羟基之间形成磷酸二酯键，  将两段核酸连接 起来的酶。 9.T4 polynucleotide kinase  （ T4  多聚核苷酸激酶 ）催化  ATP  的 γ -磷酸基转移至  DNA  或 RNA  的  5  末端。 10.Alkaline phosphatase （碱性磷酸酶 ）催化除去 DNA 或 RNA 5 11.S1 nuclease Sl 核酸酶。可降解单链 DNA 或 RNA ，产生带 5 核苷酸双链；对 dsDNA ， dsRNA ， DNA:RNA 杂交体不敏感。  磷酸 磷酸的单核苷酸或寡 二、填空题 1. 限制性内切核酸酶（ Restriction endonuclease 则的，通常第一个大写字母取自（ 属名的第一个字母  ）的命名是按属名和种名相结合的原 ），第二、三个字母取自（ 种名的前 两个字母 ），第四个字母则用（  菌株名 ）表示。 2 . Ⅱ型限制酶识别回文对称序列，在回文序列（ 内部）或（ 附近 ）切割 DNA，产生带  3 －OH和 5 － P 基团的 DNA的产物，需（ Mg2 ＋）的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需 SAM。 识别相同序列的限制酶称（ 同裂酶 ） 4.DNA 载体经 HindⅢ切割后产生粘性末端， 能发生载体自连， 影响载体与外源 DNA的连接 效率，常用的防止载体自连的方法有（ 去磷酸化 ）、（ 部分补平 ）。 5. 完全的回文序列应具备两个特点即 （能够在中间划一个对称轴， 两侧的序列两两对称互 补配对 ）和（两条互补链的 6. 限制性内切核酸酶（  5--3 的序列组成相同， 即将一条链旋转 180°，则两条链重叠 ）。 Restriction endonuclease ）通常保存在（ 50% ）浓度的甘油溶液 中。 载体和外源 DNA经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶 （Restriction endonuclease ）的影响。常用的方法有（ EDTA 法）、（加热法 ）、（苯酚 抽提法 ）、（ 试剂盒除酶法 ）。 8. 对 DNA进行双酶切时，酶切缓冲液的选择原则有 (1) （）、 (2) （）、 (3) （） 9. Klenow DNA  聚合酶是  E.coli  DNA polymerase  经蛋白酶裂解而从全酶中除去  ( )  活 性的多肽大片断，而其他活性保持不变。 E.coli DNA 连接酶与 T4 DNA 连接酶相似，但需（）的参与。 T4 多核苷酸激酶在高浓度的 ATP时发挥最佳活性，（）是其强烈抑制剂。 三、选择题：从备选答案中选出正确的结果，正确答案是唯一的。 1. 限制性内切酶一般保存在（ C）浓度的甘油溶液中。 A 10% B 20% C 50% D 60% 2. 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶（ C） A. 既可以作用于双链 DNA，又可以作用于单链 DNA B. 只能作用于单链 DNA C. 只能作用于双链 DNA D. 只能作用于 RNA 3. 已知某一内切酶在一个环状 DNA上有 4 个切点，当用此酶切割该环状 DNA，可以得到