药物分离纯化技术 色谱分离技术 层析技术chen.ppt

层析技术 主要内容： 层析技术概述； 离子交换层析； 凝胶层析； 疏水层析； 亲和层析； 反相层析。 学习目标 1、了解层析技术的发展史 2、熟悉层析技术的分类 3、掌握层析技术的原理 4、了解常用的层析介质 5、了解层析技术的操作步骤 层析技术简介 层析技术是一组相关分离方法的总称，它的机理是多种多样的，但不管哪种方法都必须包括两个相。一相是固定相，通常为表面积很大的或多孔性固体；另一相是流动相，是液体或气体。当流动相流过固定相时，由于物质在两相间的分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离，或者说，易分配于固定相的物质移动速度慢，易分配于流动相中的物质移动速度快，因而得到逐步分离。 一、层析法的发展过程 1903年 Tswett发表了吸附色谱分离植物色素的论文，三年后他在另外两篇论文中正式提出色谱法。 1931年 色谱法提出后，并未立即受到重视。经过大约20多年，由于Lederer的工作，人们才重视色谱技术。 1938年 Izmailov和Shraiber第一次使用薄层色谱法。 1938年 Taylor和Uray用离子交换分离锂和钾的同位素。40年代，合成离子交换树脂商品出现后，离子交换色谱才得到广泛应用。1944年在美国橡树岭国家实验室和衣阿华州立大学分离和鉴定了稀土元素。在1944年到50年代中，芝加哥大学和加州大学完成了超铀元素的分离。 1941年 Martin和Synge发展了分配色谱。 1944年 Martin等发展了纸色谱。 1952年 Martin和James发展了气-液分配色谱。 1956年 Van Deemter等发表关于色谱效率的速率理论，并应用到气相色谱中。 1957年 制作离子交换色谱氨基酸分析仪。 1959年 在Cordon Conference上提出了第一篇凝胶过滤色谱的报告。 1963年 Giddings的理论工作为现代液相色谱奠定了理论基础。 60年代中期 凝胶渗透色谱出现。 60年代后期 亲和色谱出现。 1969年 现代液相色谱开始受到重视。 有两次诺贝尔化学奖是授予色谱学领域的研究工作：1948年瑞典科学家Tiselins由于他的关于电泳和吸附分析的研究获奖，1952年英国的Martin和Synge因为发展了分配色谱而获奖。 二、层析分离的特点 常用的层析技术有 (亲和层析、离子交换层析、凝胶排阻层析、凝胶电泳） 特点： （1） 纯化倍数高 （2） 操作规模小，放大困难 （3）?最终产品纯化 （4） 适用于价格昂贵的产品 三、层析的分类 按溶质分子与固定相相互作用机理 吸附层析（范德华力，氢键，静电力，共价力） 分配层析（溶质在两液相间分配系数不同） 凝胶过滤（分子大小与形状） 按操作压力分类 低压（小于0.5 Mpa) 中压 (0.5-5 Mpa) 高压 (5-40 Mpa) 电泳 (溶质在电场中移动） ⑴分析色谱（10mg） ⑵半制备色谱(10-50mg) ⑶制备色谱(0.1-1g) ⑷工业生产规模色谱(20g/d) 年产10g合格的重组人粒细胞集落刺激因子（rhGcs-F），其产值高达1亿元。 根据固定相形状分类 柱层析 纸层析 薄层层析 根据流动相分类 气相层析 液相层析 超临界流体层析 按操作方式分类（展开） 迎头法（frontal analysis) 顶替法 （displacement analysis) 洗脱分析（elution analysis) 四、层析的原理 “层析谱的本质是使一种液体均匀地渗过一个相当细碎的物质的柱体，这些物质通过某种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。” ——马丁（A. J. P. Martin）（英） 基本概念 在一定的温度下，溶质在两液相之间的平衡关系服从分配定律： Kd = C1/C2 K d为分配系数 C1，C2为两液相中的溶质浓度。 应用条件：温度一定 低浓度 分配系数小的溶质在流动相中分配的数量多，移动快；分配系数大的溶质在固定相中分配的数量多，移动慢。因此可彼此分开。 分配系数主要与下列因素有关： ① 被分离物质本身的性质； ② 固定相和流动相的性质； ③ 层析柱的温度。 Ve — V0 Kd= V1 色谱分离法基本原理示意图 色谱分离法基本原理示意图 五、层析介质 要求： （1）不