多糖的结构分析 .ppt

第6章 多糖的结构分析 (1)各种单糖甲基化衍生物的基峰均为43，为CH3CO+ ; (2)被甲基化，乙酰化的单糖分子中，带有甲氧基的碳原子容易与相邻碳原子间发生断键，形成正离子。 断裂方式如下: 主要碎片(m/e)为：45.117.161.205 由161、205进一步裂解为71.87.101.129.145。 实际所得碎片为: 45.71.87.101.117.129.145.161.205 4、多糖中的乙酰基定位 原理：利用甲基乙烯醚将多糖结构上的游离羟基保护起来，脱去乙酰基，使结合的羟基游离。对游离羟基进行甲基化，去除保护基团并完全水解。单糖上甲基化的位置即是原始多糖中的乙酰位置。 第6章 多糖的结构分析 操作：保护自由羟基： 多糖样品（93mg），悬浮于二甲亚砜（12ml）加入P-甲苯磺酸（20mg），15℃混匀。 将冷至-10℃的甲基乙烯醚（5ml）滴加于上述液中，让在15℃条件下反应4hr。 自来水透析 40℃下减压浓缩至干，（以上步骤重复三次）上Sephadex LH-20柱，丙酮洗脱，10ml/管收集，合并10-17管。 浓缩至干，红外检测，样品在3400cm-1有吸收峰。 第6章 多糖的结构分析 脱乙酰基 上述糖衍生物溶于15ml甲醇，搅拌条件下加入15ml 0.2mol/L 甲醇钠的甲醇液。 混合液在75℃回流4hr，浓缩后上Sephadex LH-20柱，甲醇洗脱，10ml/管收集，合并14-24管，浓缩干燥。 红外光谱结果显示无乙酰基团（1260与1730cm-1无吸收峰） 第6章 多糖的结构分析 甲基化 去乙酰基多糖衍生物溶于5ml N，N-二甲基甲酰胺，在搅拌下相继加入2ml碘甲烷和0.4g氧化银。室温暗处搅拌反应20小时。过滤，残渣用氯仿洗，合并滤液，浓缩至干，重复甲基化6次。最后的滤液加20ml水和4ml10%氰化钠，氯仿萃取5次（水洗）。干燥后上柱，氯仿-甲醇洗脱，3ml/管收集，合并9-15管，浓缩至干。 红外光谱表明甲基化反应完全。 第6章 多糖的结构分析 多糖的结构分析 多糖（Polysaccharide）是天然大分子物质，是天然化合物中最大族之一。多糖结构的分析较蛋白质结构分析复杂，一方面是因为组成多糖的单糖品种繁多（目前已知的单糖有200多种）；另一方面即使只有一种单糖组成的多糖其连接方式的不同以及可能有分枝（蛋白质没有分枝），所以多糖的结构种类就很多，不容易分析。 第6章 多糖的结构分析 多糖结构测定的意义 从天然物质中分离得到的单体多糖化合物即使具有很强的活性与具有较大的安全性，但如果结构不清楚，则无法进一步开展其药理学与毒理学研究，也就不可能进行人工合成或结构修饰改造工作，更谈不上进行高质量的新药开发研究，其学术及应用价值将会大大降低。 第6章 多糖的结构分析 结构研究的主要程序 (1)初步推断化合物类型 1注意观察样品在提取、分离过程中的行为。 2测定有关理化性质，如不同pH，不同溶剂中的溶解度及层析行为，灼烧实验，化学定性反应等。 3 结合文献调研。 (2)测定分子式,计算不饱和度 1、元素定量分析 2、分子量测定 3、同位素峰法 4 、HI – MS等 第6章 多糖的结构分析 (3)确定分子式中含有的官能团（基本骨架等的结构分析） 1、官能团的定性及定量 2、测定并解析化合物的有关光谱 （UV,IR,MS,HNMR,CNMR等） (4) 推断并确定分子的平面结构 1、 结合文献调研 2 、结合光谱解析及官能团定性定量分析结果。 (5)推断并确定分子的主体结构 1、测定CD或ORD谱 2、测定NOE,NOESY或ZD-NMR谱 3、进行X射线晶体衍射分析或人工合成 第6章 多糖的结构分析 一、组成成分分析 1、酸水解 1-3N硫酸，100℃，水解6-8小时。用碳酸钡中和，G4漏斗过滤，蒸发皿蒸干。 气相色谱分析 纸层析（PG）： 展开剂： 正丁醇∶乙酸∶水=4∶1∶5； 正丁醇∶吡啶∶水=6∶4∶3 显色剂：常用硝酸银显色剂 A：16%硝酸银水溶液∶丙酮=1∶9（V/V