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分子生物学实验流程及相关 试剂、仪器概述 GENE COMPANY LTD 分子生物学实验概述 生物样品(细胞、组织、细菌) 细胞调节 神经科 DNA分离 RNA分离 质粒DNA基因组DNA□总RNA_mRNA 噬菌体DNA DNA测序 遗传鉴定 DNA杉 基因表达 分子生物学实验概述(续) 基因表达 报告基因载体 体外转录 基因转化 真核转录 报告基因检测 蛋白分析 蛋白分离 分子生物学主要实验流程 实验起始材料的选取和准备 门RNA的提取、纯化 目标片段的克隆和分析 DNA、RNA的提取、纯化和分析 克隆化基因的表达及表达蛋白的纯化和功 分析 基因转化实验及转基因结果分析 实验起始材料的选取和雅备 组织器官原生质体细胞细真酵时 殊材料 少量起始材料特殊病变组织「亚细胞结构 实验起始材料的选取和准备 人工气候箱、制冰机 分离准备工作 超净工作台、显微操作系 水稻卵细胞的分离 RNase抑制剂 RNase-free耗材、液氮罐 材料的速冻 超低温冰箱 长期保存 卯细胞mRNA的提取、纯化 200°C烘箱 Oligotex系列试剂盒 细胞裂解 旋涡混匀器 DEPC RNase- free DNase|、 心 去蛋白和细胞残渣 RNase-free耗材 恒温水浴锅 温浴并结合 离心机、旋涡混匀器 去盐和回收 目标片段的克隆和分析 利用 SMART CDNA文库构建试剂盒构建水稻 卵细胞CDNA文库 目标基因的获得 通过嗾菌体载体自切割或T- - Vector、平末端 载体克隆获得目标质粒 利用测序仪和通用引物对克隆的目的基因 测序 通过SMAR技术构建cDNA文库 恒温水浴锅、制冰机 第一链的合成 RTase、 RNase抑制 PCR仪 第二链的合成和扩增 恒温水浴锅、离心机 酶切、纯化和片段分离限制性内切酶、过 电泳仪器、凝胶成像系统 cDNA检测 恒温水浴 插入载体并包装 净工作台、烘箱、PCR位 文库质量检测 培养基 超低温冰箱 文库扩增及保藏 DMSO 目标基因的克隆 利用特异探针,通过核酸杂交的方法或利 用特异的抗体,通过抗原抗体反应进行文 库目标基因的筛选 利用GSP(基因特异引物)通过PCR扩增出 目标基因 通过5RACE和3RACE克隆已知部分序列的 目标基因