体外培养细胞生长与增殖过程.ppt

第四章动物细胞与组织培养 (Animal Cell and Tissue Culture) 动物体内取出组织和细胞,在体外模拟机体内的生理 条件,建立无菌、适温和一定的营养条件,使之生长 和生存,并维持其结构和功能的技术,称动物细胞与 组织培养 是动物细胞工程的重要技术基础:细胞融合、组织 工程、胚胎工程、干细胞工程、动物克隆、动物细胞 产品的大规模制备技术等等都离不开~。 4.1概述 4.1.1发展历史 41.2动物细胞的特点 413动物细胞与组织培养的概念 414动物细胞的体外培养生长特性 4.1.1发展历史 1、动物细胞(组织)培养技术的起源 19世纪所应用的胚胎学技术。 动物细胞培养的奠基人:美国生物学家哈里森 (1907年)用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法将 蛙胚神经组织培养在淋巴液中,存活几周,有细 胞突起的生长过程。 先驱者中法国学者卡勒尔:设计卡氏培养瓶自 1923年用于培养鸡胚的心肌组织成功以后,已使 多种动物组织培养获得成功。 4.1.1发展历史 2、20世纪40年代以后: 动物组织培养的科学家们研究重点集中在培养 基方面。 3、20世纪80年代以后: 随着基因工程技术和细胞融合技术的迅速发 展,已能把特定的外源基因通过PCR技术扩增几 千倍,并可转染到细胞内,使其得到高质量的表 达 4.1.1发展历史 4、近年: ●淋巴细胞杂交瘤技术,使动物细胞培养进入了 一个新领域。杂交瘤细胞能在体外悬浮情况下大 量繁殖并产生单克隆抗体 ●随着基因重组和单克隆抗体技术的发展,动物 细胞组织培养展现出越来越可观的工业化前景。 4.1.2动物细胞的特点 (一)动物细胞之间的连接特点 1.紧密连接:牢固、无间隙。 2间隙连接:2-3nm间隙。 3.隔壁连接:20-30nm间隔,有横隔 4.中间连接:无横隔、透明,间隔20-30nm。 5.桥粒连接:有间隙,有纤维形成的特殊结构 4.1.2动物细胞的特点 (二)动物细胞的培养特点: 1.动物细胞比微生物细胞大,无细胞壁。 2动物细胞倍增时间长,生长缓慢,易受污染。 3培养过程需氧量少,对机械搅拌或剪切力敏感。 4.动物细胞间主要以聚集体形式存在 5原代细胞一般繁殖50代左右即退化死亡 4.1.3动物细胞与组织培养的概念 ●动物细胞与组织培养:从动物体内取出 细胞或组织,模拟体内的生理环境条件, 在无菌、适宜温度和丰富营养条件下,使 离体细胞或组织生存、生长并维持结构和 功能的一门技术。 ●是动物细胞工程的重要技术基础。 4.1.4体外培养细胞的分型 贴附和非贴附生长: 1.贴附型细胞:细胞间相互接触;细胞与细胞外基 质(培养器皿壁或载体)结合。多数细胞属贴附型细 胞 2.非贴附型细胞:此类细胞体外生长不必贴壁,可 在培养液中悬浮生长。如:白细胞、淋巴细胞,肿癮 细胞、杂交瘤细胞、转化细胞系等 贴附型细胞 (anchorage-dependent cel 哺乳动物大多数细胞必须附着固体表面生长。当细胞布满表 面(单层)时,即停止生长。若取走一片细胞,存留的细胞就 会沿着表面生长而重新布满表面。从生长表面脱落而进入液体 的细胞通常不再生长而逐渐退化。(为单层附壁培养) 按培养细胞的形态,可分四类: 1成纤维型细胞( fibroblast 外形与体内成纤维细胞相似,梭形或不规则形 细胞贴壁后呈梭形,胞质外伸出2-3个长短不同的突起,成 放射状,胞间疏松。 起源于中胚层的细胞在体外培养时一般表现为这种形式。