（优质课件）临床分子生物学检验 绪论.pptVIP

1.临床分子生物学定义及其发展 临床分子生 物学检验的 发展:以生物 芯片为代表 的高通量密 集型技术 * 1.临床分子生物学定义及其发展 临床分子生 物学检验的 发展:以生物 芯片为代表 的高通量密 集型技术 基因芯片 基因芯片热图 第三阶段 核心技术：生物芯片（biochip）高通量技术 以基因组特异性核酸序列（DNA,RNA），蛋白质分子为靶标 为复杂性（多因素，多基因）疾病提供了有效的分子生物学检验方法 * 1.临床分子生物学定义及其发展 临床分子生 物学检验的 发展:DNA 测序技术 测序峰图 sanger * 第四阶段 核心技术：DNA测序技术（蛋白质质谱技术） 以基因组特异性核酸序列，蛋白质分子，代谢物为靶标 特点：高灵敏度，高特异性，高通量，高自动化 1.临床分子生物学定义及其发展 临床分子生 物学检验的 发展:DNA 测序技术 核酸测序技术为临床疾病扥分子诊断提供最精确的判定依据，是分子生物学检验的金标准 测序方法： 第一代：双脱氧末端终止法 第二代：焦磷酸测序法 第三代：单分子实时测序，大大降低成本，有望实现1000USD对人类基因组进行测序 * 1.临床分子生物学定义及其发展 临床分子生 物学检验的 发展:蛋白 技术 蛋白芯片技术 * 1.临床分子生物学定义及其发展 临床分子生 物学检验的 发展:蛋白 技术 检测到阳性胃癌蛋白指纹 * 2.临床分子生物学检验内容及其应用 临床分子生 物学检验的 靶标 狭义的讲，目前分子生物学检验的靶标主要以核酸为主 广义上讲，临床分子检验的生物标志物包含基因组DNA,各种RNA，蛋白质以及代谢物。 * 2.临床分子生物学检验内容及其应用 单基因病（ 孟德尔遗传 性疾病） 镰刀状红细胞贫血症的检测 一种常染色体退化遗传病 引起原因：珠蛋白的β基因发生了一个点突变 β基因的第6位密码子为GAG,编码谷氨酸,突变后为GTG,编码缬氨酸。 检测方法：该突变导致该基因丢失了一个可被MstII切开的限制性内切酶位点。 * 单基因病（ 孟德尔遗传 性疾病） 2.临床分子生物学检验内容及其应用 脆性X染色体综合征 脆性X染色体综合征导致患者智障 （Martin-Bell综合征），脆性X综合症是由于在人体内X染色体的形成过程中的突变所导致。 已发现了致病基因FMR-1，它含有（CGG）n 三核甘酸重复序列，后者在正常人约为30拷贝，而在正常男性传递者和女性携带者增多到150~500bp，称为小插入，相邻的Cpg 岛未被甲基化，这种前突变（premutation ）无或只有轻微症状。 现已可用RFLP连锁分析、DNA杂交分析、PCR扩增等方法检测 * 成年型多囊肾病 单基因病（ 孟德尔遗传 性疾病） 2.临床分子生物学检验内容及其应用 成年型多囊肾病是一种常染色体显性遗传病，发病率高，约1000人中有1名致病基因的携带者，起病较晚，多在30岁以后，主要为肾和肝中出现多发性囊肿 由于通过家系分析，已证实APKD的致病基因与α珠蛋白基因3’端附近的一段小卫星DNA序列即3’HVR(3’ hypervariable region)紧密连锁，而后者在人群中具有高度多态性，因此可以通过RFLP连锁分析进行诊断。 * 2.临床分子生物学检验内容及其应用 感染性基因 病 乙型肝炎病毒的分子生物学检验 乙型肝炎病毒核酸的检验 HBV DNA是病毒复制和传染性的直接标志。定量检测HBV DNA对于判断病毒复制程度、传染性大小、抗病毒药物疗效等有重要意义。 PCR引物常根据其S、C、P 和X 基因中的高度保守序列来设计 荧光定量PCR技术 能准确地反映HBV DNA的复制水平、病程变化和治疗恢复情况等，特异性高。 支链DNA技术，核酸杂交技术等。? * 丙型肝炎病毒的分子生物学检验 2.临床分子生物学检验内容及其应用 感染性基因 病 丙型肝炎病毒的核酸检测 肝组织内HCV RNA检测可应用斑点核酸杂交技术，血清中HCV RNA检测多采用PCR、核酸杂交、bDNA、基因芯片、转录介导的扩增系统等技术。 5′UTR区的序列最保守，种系变化程度及进化率很低，可用于区分主要基因型 * 2.