重组子导入和筛选.pptxVIP

重组子导入、表达与筛选;找找看……;一、重组DNA分子导入宿主细胞;;1原核细胞的转化（细菌转化）;宿主细胞  原核细胞：大肠杆菌 真核细胞：哺乳类动物细胞、酵母和昆虫细胞 ;;（1）CaCl2转化：;;;[原理] 利用高压脉冲，在细菌细胞表面形成暂时性的微孔，重组DNA从微孔中进入，脉冲过后，微孔复原，在丰富培养基中生长数小时后，细胞增殖，重组DNA得到大量复制。;3）转化率： DNA分子转化宿主细胞获得转化子的效率 什么叫转化子？ 导入???源DNA分子后能稳定存在的宿主细胞 什么叫重组子？ 导入的外源DNA为重组DNA的转化子 ;;影响因素： 重组DNA： 分子量小，转化率高； 亲和性强的质粒载体转化率高； ccc质粒DNA载体转化率高 受体细胞 转化方法： 电击法转化率最高；氯化钙法次之;（1）农杆菌转化法;基因枪法（gene gun）是依赖高速的金属微粒将外源基因导入活细胞的一种转化技术。 ;优点：（1）无宿主限制。可以对任何基因型材料进行转化研究；(2)靶受体几乎包括所有具有潜在分化能力的组织或细胞。（3）易于操作。 缺点：如转化频率低、结果的重复性差，易导致基因沉默，实验成本较高等。;3、导入动物细胞;脂质体法;含有目的基因的重组宿主细胞（如细菌）可以通过 规模化的基因工程生产目的蛋白（如激素）;找