实验二 碱性磷酸酶提取及其比活性测定精编.pptVIP

碱性磷酸酶的提取及其 比活性测定 带教:张学礼、戴薇薇 龚张斌、黎志萍 材料选择—细胞的破碎—→分离纯化—鉴定 碱性磷酸酶(ALP,AKP) Alkaline phosphatase 、实验目的 1、掌握以有机溶剂分离技术提取蛋白质及酶 的原理和方法; 2、掌握酶蛋白纯化过程中的活性、比活性、 得率及纯化倍数的概念及计算; 3、了解AKP的临床意义及纯化蛋白质的一般方 法 、实验原理 1、AKP概述 ①催化有机单磷酸酯水解,并有转移磷酸基的作用 C6Hs-0--PoNa+H20 -CHSOH+ NayHPO4 ONa ④体内位置:细胞膜表面 肾小管的筛状缘 肠粘膜的微绒毛 胆小管的细胞膜缘 肝窦状腺表面 胎盘合体细胞滋养层细胞外表面 ⑤正常血清: ALP主要来自肝(或胆管)和骨骼,约各占总活性 的一半 ⑥临床意义:血清AP活力增高常见于 肝胆疾病(胆道阻塞等) 骨骼疾病(佝偻病等) 甲状腺功能亢进 妊娠和生长期儿童 2、AKP的分离、提取、及纯化 整个制备过程可分为5个阶段: ①材料的选择和预处理, ②细胞的破碎, ③提取, ④纯化(包括盐析、有机溶剂提取、层析、电泳 等), ⑤浓缩、干燥及保存 ①取材 取酶含量丰富、容易提取、新鲜的组织 本次实验:肝脏 ②生物组织与细胞的破碎 机械破碎法:高速组织捣碎机、匀浆器、研钵 渗透破碎法;低渗条件使细胞溶胀而破碎 反复