（精选课件）爆发性艰难梭菌结肠炎.pptVIP

2. 艰难梭菌菌株检测 ( 1) 培养 常采 用 CCFA 培 养 基 ( cefoxitin cycloserine fruc-tose agar，CCFA) 或 CD 显色培养基进行厌氧培养。CCFA 培养基需培养 48 ～ 72 h，对粪便标本通过加热或乙醇预处理可以减少粪便正常菌群，筛选出细菌芽孢。CD 在 CCFA 上具有典型的 “马粪” 气味，菌落在紫外光下显示黄绿色荧光，典型的菌落可使用API 20A、Vitek 2 Compact 或者 MALDI-TOF MS 技术等进行鉴定。 * 使用 CD 显色培养基可以缩短培养时间至 18 ～24 h，且无需对粪便样本进行加热或乙醇等预处理。CD在显色培养基上的菌落具有黑色、扁平、粗糙、边缘不整齐的特点，同时可以达到直接鉴定 CD 的目的。 厌氧培养敏感度较高，但不能区分菌株是否产生毒素，可作为难辨梭菌筛查的有效方法之一，菌株可用于流行病学调查。 * ( 2) 谷氨酸脱氢酶检测 谷氨 酸 脱 氢 酶 ( glutamate dehydrogenase，GDH)是所有 CD 高水平表 达 的 代 谢 酶，可 用 于 筛 查 疑 似CDI 患者粪便样本中是否存在 CD。通常使用酶免疫方法 ( enzyme immunoassays，EIAs) 直接检测粪便标本中的 GDH 抗原。检测时间约 1 ～ 2 h，操作简便且成本较低。系统综述显示该试验具有较高的敏感度( ＞ 90% ) 、特异性 ( ＞ 90% ) 和阴性预测值 ( 95% ～100% ) ，但同 CD 培养一样，不能区分菌株是否产生毒素，近 20% 的 GDH 阳性患者的 CD 不产生毒素。该方法可作为一种高度敏感的初筛试验，GDH 试验阴性，可直接报告临床用于排除 CDI; GDH 试验阳性，需要进一步检测其毒素或毒素基因进行确证。 * 3. 艰难梭菌毒素检测 ( 1) 细胞毒性试验 细胞毒性试验 ( cell cytotoxicity assay，CCTA) ，即细胞毒性中和试验 ( cell cytotoxin neutralization assay，CCNA) ，用于直接检测粪便标本中存在的 CD 毒素。将不成形稀便标本离心，上清经 0. 45 μm 滤膜过滤，将无菌 PBS 稀释的粪便滤液加入细胞悬液 ( Vero 或Hep2 细胞等) ，分别加入和不加入抗 CD 毒素的中和抗体，37 ℃ 5% CO2 环境培养，24 h、48 h 后显微镜下观察细胞病变效应 ( cytopathiceffect，CPE) ，而加入特异性抗毒素抗体能阻止这种细胞病变。CCTA 是实验室诊断 CD 的金标准，特异性强，敏感度高 ( 最低可检测出 10 pg 毒素) ，但需要细胞培养及显微镜观察的 相 应 设 施 和 技 术，操 作 繁 琐，耗 时 长 ( 48 ～72 h) ，判定结果需要一定经验的技术人员，不适宜临床常规检测。 * ( 2) 产毒素培养 产毒素培养 ( toxigenic culture，TC) 用于检测 CD菌株的产毒素能力。将不成形稀便标本接种于 CCFA培养基或 CD 显色培养基上，37 ℃厌氧培养至少48 h，挑取典型菌落接种至液体培养基中，厌氧培养 48 h，0. 45 μm 滤膜过滤培养上清进行细胞毒性试验。也可用 EIAs 检测固体培养基上菌落产毒素能力，检测时间可缩短至 2 ～ 3 d，但敏感度稍低。 TC 是实验室诊断 CD 的参考方法，敏感度高，特异性强，但操作繁琐，耗时长 ( 5 d 左右) ，结果判读的技术人员需要有一定经验，不适宜临床常规检测，可用于流行病学监测，并作为评价其他检测方法的参考标准。 * ( 3) 毒素免疫检测 目前常用 EIAs 直接检测腹泻粪便标本中的 CD 毒素，用单克隆抗体特异性结合 CD A/B 毒素蛋白进行检测。EIAs 检测 CD 毒素的优点是特异性高 ( ＞ 90% ) ，能区分产毒株和非产毒株，并且检测周期短，数小时即可出结果，操作简便，应用广泛; 缺点是敏感度较低( 39% ～ 76%) ，不 能 单 独 用 于 CD 感染的实验室诊断。目前，EIAs 检测 CD 毒素常和 GDH 检测或核酸扩增技术 ( nucleic acid amplification tests，NAATs) 联合应用，用于 CD