（优质医学）蛋白质的结构和功能.ppt

（三）电泳 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 。 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 * 几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳：通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳：是蛋白质组学研究的重要技术。 * * （四）层析 层析(chromatography)分离蛋白质的原理 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的 。 * 蛋白质分离常用的层析方法 * 离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 * 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析：利用各蛋白质分子大小不同分离。 * * * （五）超速离心 * 超速离心法(ultracentrifugation)既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。 *蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient, S)表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关 。 * 三、多肽链中氨基酸序列分析 1. 分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成 2. 测定多肽链的N端与C端的氨基酸残基 3. 把肽链水解成片段，分别进行分析 4. 测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用Edman降解法 5. 经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。 （一）改进的Sanger法 * 水解肽链的方法及特征 裂解剂 裂解位点 胰蛋白酶 Lys、Arg（C） 胰凝乳蛋白酶 Phe、Tyr、Trp（C） 弹性蛋白酶 Ala、Gly、Ser、Val（C） 胃蛋白酶 Phe、Trp、Tyr（N） 溴化氰 Met（C） 羟胺 Asn—Gly * 通过核酸推演的方法 按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列 分离编码蛋白质的基因 测定DNA序列 排列出mRNA序列 * 重要内容： 1、重要名词：protein; peptide bond; GSH; isoelectric point； peptide unit; motifs；domain; subunit； allosteric effect; protein denaturation; molecular disease; 蛋白质的一、二、三、四级结构 2、结构层次 元素组成：C、H、O、N（16%）、S 结构单位：20种L-α氨基酸（芳香族、含硫、酸性、碱性氨基酸等） 一级结构：稳定力：肽键；多肽链；N端?C端； 二级结构：稳定力（氢键）；类型（?螺旋，?折叠，?转角，无规卷曲） 三级结构特点：稳定力 四级结构特点：稳定力 * 3、重要性质：两性解离及带电状态判定；紫外吸收；沉淀； 变性; 显色反应 4、分离纯化：方法、分类及原理 （凝胶过滤层析技术，SDS电泳 技术，双 向电泳的原理。 ） 5、结构与功能关系（举例） * 1、蛋白质变性是由于 A ．蛋白质空间构象的破坏B ．氨基酸组成的改变 C ．肤键的断裂D ．蛋白质的水解 2、下列哪种氨基酸体内不能合成，必需靠食物供给