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2020-09-03 发布于福建
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电子晶体学与电镜三维重构器等 GroEL GIOEL-ADP GroEL-AMPPNP GNOEL-ATP 电子晶体学与电镜三维重构 ●概况 ●电子显微镜的基本知识 ●电镜三维重构的理论基础有关的实验技术 ●应用实例 T概况 ●目前广泛使用的术语方法特点 ●膜蛋白结构测定的困难电子晶体学与X-射线晶体学的比较电子晶体学的历史结构测定的一般步骤 T概况 ●目前广泛使用的术语: Electron crystallography电子晶体学 Electron cryomicroscopy低温电子显微学 3-dimensional reconstruction of electron microscopy 电镜三维重构 Electron diffraction and imaging电子衍射和成像「概况 ●方法特点 ■分辨率:3-30A,大多数达不到原子分辨率 ■适用的样品:晶态或非晶态,复杂的大分子组装体 ●蛋白质的二维晶体 ●螺旋状分子复合物 ●纤维样品 ●单颗粒的大分子复合物(MW250kDa) ●病毒 ■无相位问题,电镜像本身即包含振幅和位相信息 T概况 ●膜蛋白结构测定的困难 ■PDB统计:内在膜蛋白2003年3月58 膜蛋白难于结晶膜蛋白多是多重复合物,分子量大 T概况 ●电子晶体学与Ⅹ-射线晶体学的比较 X-ray E ■研究对象:晶体20um微小晶体与溥膜,单颗粒,螺旋纤维数据形式:衍射数据衍射数据,显微像相位问题有无 T概况电子晶体学的历史 20世纪30年代,原苏联的一个晶体学小组开始电子衍射的方法研究 ■1968年Klug和 Derosier开创电子显微镜三维重构的基本原理和方法重构了T4烟草花叶病毒颗粒尾部的三维空间结构。 1975年, Henderson和 Unwin重构了细菌视紫红质(BR)的7A分辨率的三维结构电子晶体学的一个里程碑。 1982年,Klug因此获得诺贝尔化学奖 1990年, Henderson等人把细菌视紫红质的研究提高到了3.5A分辨率,并提出了原子模型。 ■最近十几年来,电子晶体学已经发展成为一种Ⅹ射线晶体学所不可替代的生物大分子空间结构分析的有效手段。 T概况 ●结构测定的一般步骤 ■电镜样品的制备(包括蛋白质二维晶体的生长) 电镜观察照相数据处理及计算机三维重构 (构建原子模型) 电子晶体学与电镜三维重构 ●概况电子显微镜的基本知识 ●电镜三维重构的理论基础有关的实验技术 ●应用实例