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第九章酶免疫技术
第一节酶免疫技术的特点
大经典标记技术
荧
放射免疫技术
光
免
疫
技
酶免疫技术
术
原理及特点
抗原抗体反应的特异性
酶高效催化反应的专一性
主要试剂:
酶标记的抗体或抗原
酶标物特点:
免疫学活性
酶对底物的催化活性
原理及特点
原理:
特点:
灵敏度高、特异性强、
酶标抗体(抗原)与抗原准确性好
(抗体)的特异性反应
酶标记试剂能够较长
酶对底物的显色反应
时间保持稳定
操作简便、对环境没
对抗原或抗体进行定位、
有污染。
定性或定量的测定分析
易与其它技术偶联
衍生出适用范围更广的
新方法。
酶和酶作用底物
标记酶的要求:
活性高
性质稳定
专一性强
酶催化底物的显色信号易于判断和测量
方法敏感,重复性好,简单易行
酶的底物易于配制保存,酶及底物价廉
酶和酶作用底物
常用酶
糖蛋白(主酶)
RZ值与酶活性无关
亚铁血红素(辅基)
酶活性单位比RZ值
主酶与酶活性无关
更为重要
辅基是酶的活性中心
辣根过氧化物酶(HRP)
RZ值:403nm(辅基)
与275mm(主酶)
ELISA中应用最为
0D值之比
广泛的标记用酶
酶和酶作用底物
常用酶
碱性磷酸酶(AP)
菌源性AP
肠粘膜AP
β-半乳糖苷酶(β-Ga1)
用于均相酶
免疫测定
酶和酶作用底物
常用底物
HRP的底物
HRP
DH2+H202→→→D+2H20
H2Q2为受氢体,HP对受氢体的专一性很高
供氢体DH2习惯上被称为底物,底物有多种
酶和酶作用底物
常用底物
四甲基联苯胺TMB
邻苯二胺OD
HRP的常见底物
5氨基水杨酸5ASA
2,2′氨基一二(3-乙基苯并
噻唑啉磺酸-6)铵盐ABTS
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