酶联免疫吸附剂测定...pptVIP

酶联免疫吸附剂测定 酶联免疫吸附剂测定( enzyme linked immunosorbent ssay,ELSA)采用抗原与抗体的特异反应将待测物与 酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应, 定量测 定。1971年 Engvall FIlPerlmanr发表了该方法用于|gG定 量测定的文章,使得1966年开始 原定位的酶标抗 体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。  1971年瑞典学者 Engyai和 Perlmann,荷兰学者 Van Weerman和 Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫 测定方法,即酶联免疫吸附测定法( enzyme linkedimmunosorbentassay,EL|SA)。ELSA现在已成为目前分析化 学领域中的前沿课题,它是一种特殊的试剂分析方法;是在免疫酶技 mmunoenzymatictechniques)的基础上发展 疫 复杂生物体系中生命物质的化学测量是揭示生命奥秘的重要手段,在 食品检验、疾病诊断和预防的过程中屯目益古现箕重要作角。 典的化 学分析方法 滴定分析 重量分 析、简单的 吸 光度法) 将物度接的餐怪金:后生切体成 于是,一系列针对生物体系中化学成分的测量方法应运而生。免疫化 分析即其重要成员, 手段有机结合,为 生命体系中高特异性、超微量的分析提供了解决方法  基本原理 蹑厦忘抗曾蹩量隨蹙将物鼕磚该是統餒踅甓。 在这种测定方法中有3种必要的试剂: 相的抗原或抗体(兔疫吸附剂 ②酶标记的抗原或抗体(标记物) ③酶作用的底物(显色剂) 测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性, 后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物 仍保貿其原免疫活性与酶活性:当偶联物与固相载体上的抗原(抗体) 反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而 呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。这 电子显堂察,也可用分光 单,方便讯速,特异性强  特点 1敏感性高 ·2特异性强 3重复性好 4简便快速  方法类型 双抗体夹心法 二双位点一步法 间接法测抗体 四竞争法 五捕获法测lgM抗体 六应用亲和素和生物素的ELsA  双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法, 操作步骤如下: ·(1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固 相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。 ·(2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应 一段时间,让标本中的抗原与固相载体上 的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤 除去其他未结合的物质。  A、已知抗体吸附 B、加可能含抗 于戟体,洗涤 检溶液,抗原 合,洗涤 C、加酶标记抗体 与抗原抗体复合物 D、加酶作用于底物 水解量一抗原存在量 结合,洗涤 双抗体夹心法示意图  (3加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗 原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶 标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标 本中受检物质的量正相关。 (4)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物 成为有色产物。根据颜色反应的程度进行 该抗原的定性或定量。 根据同样原理,将大分子抗原分别制备固相 抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹 心法测定标本中的抗体  适用范围 双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上 的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及 小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹  通常确定一个抗体特异性的表位大概是10 几个氨基酸的大小,抗原分子有一个结合 抗体的位点就叫一价。如果抗原分子太小 (比如只有一价),包被抗体在结合抗原 时会把所有的结合位点都占据了,检测抗 体就没有地方结合了