生物化学实验课件2 动态.ppt

四、操作步骤 ? 1 、消化：在电子天平上称取小麦粉 0.2000g--0.4000g 置于凯氏试管底部→加 混合混合催化剂 0.5g 和 3mL 浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（ 2h 左右） 取出放入通风橱内至不冒白烟，向其中加 20mL 水，并移至 100mL 容量瓶定容→即 得样品消化液。 ? 同时每 4 组 8 人做 1 空白实验： 0.5g 混合催化剂 +3mL 浓硫酸置于凯氏试管中放入 消化炉加热至淡绿色（ 1h 左右）→冷却后加水移入 100mL 容量瓶中定容得空白消 化液。 ? 2. 蒸馏与吸收：吸取 10mL 2% 的硼酸于三角瓶中→加 4d 甲基红 - 溴甲酚绿混合指 示剂（若变绿色则用 0.01mol/L HCl 调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管 尖插入液面以下，再吸取 5mL 消化液从漏斗上方加入蒸馏室内用水洗两次，并加 入 10mL 40%NaOH 后水封（注意：勿使漏斗内玻杆取下以防漏气），然后打开通 气阀进行加热蒸馏，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏3min→先移去吸 收液再停止加热以防倒吸。 ? 3. 滴定：用 0.01mol/L HCl 滴定吸收液由绿色退去变红色为止，记下耗去标准 盐酸的体积 (V 1 .V 0 ) 。 ? C ：标准盐酸溶液摩尔浓度 (0.01) 。 ? V 1 ：滴定样品用去的盐酸溶液平均毫升数。 ? V 0 ：滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均毫升数。 ? W ：样品重量（ mg ）。 ? 14.01 ：氮的原子量。 ? K=5.7 ? M=12.5% ? V 2 =100mL ? V 3 =5mL 五、结果计算 100 ) 1 ( 01 . 14 ) ( % 3 2 0 1 ? ? ? ? ? ? ? K V V M W V V c ）＝ 蛋白质含量（ 实验六 甲醛滴定测氨基氮 一、实验目的 ? 1 ．加深对氨基酸两性解离的认识。 ? 2 ．掌握甲醛滴定法的原理及应用。 三、实验仪器、试剂及材料 1. 实验仪器： ? 微量碱式滴定管（ 10mL ）、 2. 试剂： ? (1) ． 0.5 ％酚酞指示剂：。 ? (2) ． 1 ％甘氨酸即 1 克加 100mL 水配制而成 ? (3) ． 0.1mol ／ L 标准氢氧化钠溶液（使用前需标定）。 ? (4) ．中性甲醛溶液：取分析纯甲醛 (36 ％～ 37 ％ ) 溶液 20mL ，加 0.5 ％酚酞指示剂约 3 滴，滴加 0.100mol ／ L 的氢 氧化钠溶液，使溶液呈微粉红色（临用前中和）。 ? 氨基酸为两性离子，在水溶液中有下列平衡： ? RCHCOO- +2HCHO ＝ RCHCOO- + H+ ? ↓ ↓ ? NH3+ N(CH 2 OH) 2 ? ? 常温下甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合生成亚羟甲基化合物， 使上述平衡右移促使 NH3+ 释放 H+ ，从而使溶液酸度增加，滴 定终点移至酚酞的变色域内（ pH 值 9.0 左右），根据滴定终 点时所消耗标准碱的量即可算出反应体系中存在的游离氨基 即氨基氮的含量如果样品为一种已知的氨基酸，即可算出该 氨基酸的含量。如果样品为未知氨基酸或几种氨基酸的混合 物，则只能算出其氨基氮的含量。 二、实验原理 四、操作方法 ? 已知氨基酸溶液中氨基酸含量的测定 : ? 取 3 只三角瓶编号① 2mL 1% 甘氨酸② 2mL 1% 甘氨 酸③ 2mL 水（空白） ? 均加 5mL 水和 5mL 中性甲醛（用前加 2 滴 0.5% 酚酞 滴加 0.1mol/LNaOH 调至淡红色），及 4 滴 0.5% 酚酞 混匀→用 0.1mol/L 滴至粉红色出现为止→分别记下 耗去标准碱的体积 (V 1. V 2. V 0 ） 五、结果处理与计算 式中： V ：滴定样品所消耗标准碱的平均体积（ mL ）。 V 0 ：滴定空白所消耗标准碱的体积（ mL ）。 C ：滴定时用标准氢氧化钠的浓度（ 0.1 mol ／ L ） . 14.01 ：氮的摩尔质量。 100 100 / 3 1 / ) 2 ( / 1 1000 2 14 75 2 01 . 14 ) 0 ( ? ? ? ? ? ? ? ? ） （ ） ）甘氨酸含量（ （ ） （ ） 甘氨酸含量（ ） ）氨基氮含量（ （ ml g ml mg ml mg C V V ? 说明： ? 1. 本法优点是简单快速，缺点是不够准确， 其准确度仅达到氨基酸或氨基氮理论含量的 90 ％。 而且，如果样品液中含有脯氨酸或酪氨酸时滴定 误差更大，因为脯氨酸与甲醛作用后生成不稳定 化合物使结果偏低，酪氨酸的酚基结构又使结果 偏高。 ? 2 ．甲醛滴定法常用以测定蛋