水产微生物 实训九 细菌的简单染色技术 技能实训 细菌的简单染色法.docVIP

技能实训 细菌的简单染色法 1. 知识要点 简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，常用结晶紫、美蓝、石炭酸复红等碱性染料。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察，但不能鉴别细菌的结构与染色特性。 2.操作步骤 （1）涂片:在洁净的载玻片中央加一小滴无菌水，以无菌操作用灭菌的接种环取少许（大肠埃希氏菌、枯草芽胞杆菌或金黄色葡萄球菌）的培养物置于水滴中并与水充分混匀，涂成极薄的菌膜（图3-40）。 （2）干燥:涂片在空气中自然干燥，必要时，可将标本面向上，在火焰高处烘干，切勿靠近火焰，以免标本干焦、菌体变形。 图3-40 简单染色法（3）固定:手执载玻片的一端(涂有标本的远端)，将已干燥的标本片有菌的一面向上，使背面在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3～4次，使固定后的标本载玻片触及皮肤时的稍感烫为度，但决不能在火焰上烧烤，否则菌体形态毁坏。固定的目的是:①杀死涂片中的微生物；②使菌体蛋白质凝固附着的载玻片上，以防染色过程中被水洗掉；③ 图3-40 简单染色法 （4）染色:在已干燥、固定好的涂片上，滴加适量的（足够覆盖菌膜即可）美蓝染色液，染色1～2min。 （5）水洗:斜置涂片倾去染色液，用水自玻片上端缓慢冲洗，直到流下的水无色为止。注意切勿使水流直接冲洗菌膜处。 （6）干燥:自然干燥，或用吸水纸轻轻吸去多余水分，再微微加热加快干燥速度。 （7）镜检:按普通光学显微镜操作。 （8）结果记录:将显微镜观察到的菌体的形态特征以生物绘图的方式记录下来或用显微摄影记录下来。 任务二 细菌的革兰氏染色 1. 知识要点 革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如沙黄)复染（图3-41）。经此方法染色后，细菌保留初染剂蓝紫色的为革兰氏阳性菌；如果细菌的初染剂被洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。 图3-41 革兰氏染色法 2.操作步骤 （1）涂片:在一洁净的载玻片偏左和偏右各加一小滴水。以无菌操作用接种环挑取少许大肠埃希氏菌与左边的水滴混匀，再以相同的操作挑取少许金黄色葡萄球菌与右边的水滴混匀，然后将左、右两滴菌液延伸至玻片中央，使两种菌在玻片中央区域混合，形成含有两种菌的混合区。 （2）干燥、固定:操作同上。 （3）初染:在已干燥、固定好的涂片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，以覆盖菌膜为宜，染色1～2min后，水洗。水洗后将残留在玻片上大的水滴甩掉。 （4）媒染:滴加鲁戈氏碘液覆盖菌膜部位，染1～2min后，水洗同上。 （5）脱色:滴加95%酒精2～3滴，微微摇晃3～5秒钟，使酒精能均匀布满菌膜，斜持玻片使酒精流出，再滴加酒精，直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色为止，之后马上水洗。脱色的时间，可根据涂片的厚度灵活掌握，通常在15～40秒之间。 （6）复染:滴加沙黄染色液复染1～2min后，水洗。 （7）镜检:彻底干燥后置油镜观察。干燥的操作同简单染色法。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。 （8）结果记录:将观察到的革兰氏染色结果以正确的方式报告。