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《医学生物化学实验》教案 第 1 次课 2 学时 实验项目 3，5-二硝基水杨酸法（ DNS法）测定还原糖 实验性质 设计性实验 1、了解糖的还原性 教学目的和要 2、掌握还原糖定量测定的原理和方法。 求 3、熟悉分光光度计的使用方法。 教学重点与难 重点 : 绘制标准曲线的方法，分光光度计的使用原理和使用方法。 点 难点：标准曲线的应用。 1.试剂 （1） 1mg/mL 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖 100mg，加少量蒸馏水溶 解后，以蒸馏水定容至 100mL，即含葡萄糖为 1.0mg/mL 。 （2 ）3 ，5-二硝基水杨酸试剂： 称取 6.3 g 3 ，5-二硝基水杨酸并量取 262 mL 2mol/L NaOH 加到酒石酸钾纳的热溶液中（ 182 g 酒石酸钾纳溶于 500 mL 水中），再加 5 g 结晶酚 实验材料 和 5 g 亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到 1000 mL 贮于棕色瓶中。 （3）未知浓度还原糖。 2.材料 小麦淀粉或玉米淀粉。 3.器材 分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。 一、 实验原理 ★：在 NaOH 和丙三醇存在下， 3，5-二硝基水杨酸（ DNS）与还原糖共 热后被还原生成氨基化合物。 在过量的 NaOH 碱性溶液中此化合物呈桔红色， 在 540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用 比色法可测定样品中的含糖量。 OH NO 2 OH NH 2 HOOC + 还原 糖 HOOC NO 2 NO 2 (DNS) （3 －氨基 －5 －硝基 水 杨酸 ） ? 黄色 桔红色 二、实验步骤： 1.取 7 支具塞刻度试管编号，按表 1 分别加入浓度为 1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏 水和 DNS 试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。 实验内容 表 1 葡萄糖标准曲线制作 1mg/ml 葡萄糖 蒸馏水 DNS 葡 萄 糖 含 光 密 度 值 管 号 标准液 (mL) (mL) (mL) 量 (mg) (OD-540nm) 1 0 0.5 0.5 0 2 0.1 0.4 0.5 0.1 3 0.2 0.3 0.5 0.2