硅胶柱层析的操作方法及注意事项.pdfVIP

. 硅胶柱层析 一、硅胶柱层析的原理 利用吸附原理，即利用硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，而 使混合物中各成分得以分离的色谱方法。 二、硅胶柱层析的操作方法及注意事项 1、装柱 操作要点：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。 有干法装柱和湿法装柱两种方法 （1）干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，中间不应间断，形成一细流慢慢 加入管内。也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。柱装 好后，打开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。 （2 ）湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱 剂缓慢流出。然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调 成混悬液慢慢加入柱内， ），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降， 此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱 内沉降不再变动为止。然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。根据加样 量控制洗脱剂液面至一定高度。 匀浆法： 搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。 如果洗脱剂是石油醚 / 乙酸乙酯 / 丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿 / 醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是 乙酸乙酯 / 丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久 置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去 1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用 氯仿体系过柱。 2、上样 将欲分离的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品 溶液，加入层析柱中硅胶面上。如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶 于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的 1/10 ）与其拌匀， 除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面） ， 再覆盖一层硅胶即可。 ;. . 上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅 胶的 1/60~1/30 。 3、洗脱 洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选，一般 TLC 展开时 Rf 值为 0.2~0.3 的溶 剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。 先打开柱下端活塞，保持洗脱剂流速 1~2 滴/ 秒。上端不断添加洗脱剂（可 用分液漏斗控制添加速度与下端流出速度相近） 。如单一溶剂洗脱效果不好，可 用混合溶剂洗（一般不超过三种溶剂） ，通常采用梯度洗脱。洗脱剂的洗脱能力 由弱到强逐步递增。 4 、收集处理 等份收集洗脱液，每份收集量大概与所用硅胶的量相当。每份洗脱液采用薄 层定性检查，合并含相同成分的洗脱液。经浓缩、重结晶处理往往可得到某一 单体成分。如仍为几个单体成分的混合物，不易析出单体成分的结晶。则需要 进一步层析或用其他方法分离。 注： (1) 柱色谱分离能力比薄层分离能力强，效果更好，尤其对结构相似、性质 接近、采用薄层难以分离的成分分离效果好。 (2) 洗柱子能不用含水的混合溶剂，就尽量不要用。 ;.