常规试剂配制与测定方法.参考分享.docVIP

生物、化学 -常用试剂配制 常规试剂配制与测定方法 一、 溶液的配制 1、 Mandels 营养盐溶液 (1000 mL) 名 称 重 量(g) 硫酸铵 ((NH 4 2 4 14 ) SO ) 磷酸二氢钾 (KH 2 4 20 PO ) 尿素 (H2 NCONH2 ) 3 硫酸镁 (MgSO4· 2 O) 3 7H 2 · 2 4 氯化钙 (CaCl 2H O) 注:用煮沸 10 min 后的蒸馏水配制。 2、 Mandels 微量元素溶液 (1000 mL) 名 称 重 量(g) 氯化钴 (CoCl 2· 2 3、 7 6H O) 硫酸锌 (ZnSO4· 2 O) 1、 4 7H 硫酸锰 (MnSO4· 2 O) 1、 6 H 硫酸亚铁 (FeSO4· 2 O) 、 0 7H 5 注:用煮沸 10 min 后的蒸馏水配制。 3、 DNS 试剂的配制 (1000 mL) (1) 取 :3,5-二硝基水杨酸 (C H 4 N O ) 7、5 g 7 2 7 氢氧化钠 (NaOH ) 14、0 g 充分溶解于 1000 mL 水中 (水预先煮沸 10 min) (2) 加入 :酒石酸钾钠 (C4H4 O6KNa·4H2O) 216、 0 g 苯酚 (在 50 ℃水浴中融化 ) 5、5 mL 偏重亚硫酸钠 (Na2S2O5) 6、0 g (3) 充分溶解后盛于棕色瓶中 ,放置 5 天后便可使用 ,平时盛一小瓶 (250 mL) 使用 ,要 放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。 生物、化学 -常用试剂配制 注意 :倒入瓶中时要尽量装满！！ 4、 考马斯亮蓝 G-250 的配制 (1000 mL) 称考马斯亮蓝 G-250 100 mg即 0、1g 溶于 50 mL 95%乙醇中 ,加入 100 mL 85 % 磷酸 ,用蒸馏水稀释至 1000 mL , 滤纸过滤。最终试剂中含 0、01 %(w/v) 考马斯亮蓝 G-250,4、7 %(w/v) 乙醇 ,8、 5 %(w/v) 磷酸。 5、 1、0 M 柠檬酸缓冲溶液的配制 (1000 mL) 名 称 分 子 量 Mn 重 量(g) 6 8 7 2 O) 210 210 柠檬酸 (C H O ·H NaOH 40 、 5 74 准确称取柠檬酸 210 g,溶于约 750 mL 煮沸 (10 min)蒸馏水中 ,待柠檬酸充分溶解 后加入氢氧化钠 74、5 g,完全溶解后将上述溶液转移到 1000 mL 容量瓶中 ,冷却后将 容量瓶定容到 1000 mL( 原始 pH4、45)。(检验方法 :取 1、0 M 柠檬酸缓冲溶液稀释 20 倍,测定稀释液的 pH 值,pH 值应为 4、8) 6、 标准糖溶液的配制与标准方程的测定 (1) 标准糖溶液的配制 准确称取 2、000 g 葡萄糖 /木糖 (葡萄糖 /木糖需 105 ℃烘干 3 h),蒸馏水溶解 ,全 部转移至 1 L 容量瓶内 ,摇匀 ,配制成 2 g/L 葡萄糖 /木糖溶液。 取 9 个 100 mL 容量瓶、 1 支 20 mL 刻度吸管 ,分别吸取 2 g/L 葡萄糖 /木糖溶液 10 mL、20 mL、 30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL 依次加入容量瓶 ,蒸馏水定容 ,摇匀。即为 0、2 g/L 、0、4 g/L、0、6 g/L 、0、8 g/L、1、0 g/L 、 1、2 g/L、1、4 g/L 、1、6 g/L、1、8 g/L 、 2、0 g/L 葡萄糖 /木糖标准溶液。 取 6 个 30 mL 容量瓶、1 支 20 mL 刻度吸管 ,分别吸取 2 g/L 葡萄糖溶液 10 mL、 12 mL、14 mL、 16 mL、 18 mL、20 mL 依次加入容量瓶 ,每瓶再加入 1、5 mL 柠檬酸缓冲液 ,蒸馏水定容 ,摇匀。即为 1、0 g、1、2 g、1、4 g、1、6 g、1、8 g、 2、0 g 酶解葡萄糖。 标准方程的测定 : 葡萄糖 /木糖标准方程的测定 生物、化学 -常用试剂配制 取 10 支 25mL 刻度管 ,10 支 1mL 刻度吸管 ,分别加入 0、 2 g/L、0、 4 g/L、0、 6 g/L 、0、8 g/L 、1、0 g/L 、1、2 g/L 、1、4 g/L 、1、6 g/L、1、8 g/L、 2、0 g/L 葡萄糖 /木糖标准溶液 1 mL,DNS 溶液 3 mL。100 ℃煮沸 5 min, 水浴冷却后定容至 25 mL, 摇匀。以蒸馏水作为空白对照 ,550 nm 测定吸光度 A 。以 A 为纵坐标 ,C 为横坐标 , 制定标准曲线。 (7230 型分光光度计输出方程为 :A = MC + N,723 型