蛋白质电泳技术介绍精品课件.pptVIP

Company Logo LOGO SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS(polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE) 基本原理 1.SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂。 2.蛋白质样品在100℃用SDS和还原剂处理，可解聚成亚基,加入SDS，改变了蛋白质的构象。 3.各种SDS-蛋白质复合物均带相同密度的负电荷，其荷电超过了原蛋白质，消除了不同蛋白质的荷电差异。 图解 多孔凝胶 混合大分子 电泳 操作流程 制胶 上样 电泳 染色 脱色 制胶 1将玻璃板用蒸馏水洗净晾干，把玻璃板在灌胶支架上固定好 2 按照配方制备分离胶，TEMED在灌胶前加入混匀，迅速灌胶 3 在分离胶上迅速并轻柔的加上水或无水乙醇进行水封（凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面） 4 倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干,按比例配好浓缩胶,连续平稳加入浓缩胶至离边缘5mm处,迅速插入样梳,静置40分钟 具体步骤 上样 按一定顺序在加样孔中加入样品，根据SDS电泳玻璃板 间隙厚度不同，选择加入样品量。 电泳 打开电源将电压调到80v（一般15min左右），待样品跑过压 缩胶后将电压调到120v至样品电泳到胶底部为止。 染色 将凝胶小心取下放入容器中，加入染色液（考马斯亮蓝 ），用摇床摇2－3h 脱色 待条带清晰后倒出染