蝗绿僵菌高渗透压敏感蛋白MaSho1的功能研究.pdfVIP

中文摘要 摘 要 昆虫病原真菌作为重要的杀虫真菌，具有对环境友好、害虫不易产生抗性、能 实现对害虫种群持续控制的优点，但其防效不稳定、杀虫速度慢、生产成本高等 缺点限制了其广泛应用。分生孢子作为昆虫病原真菌的主要侵染器官，在真菌的 生长和繁殖过程中起着关键性的作用，孢子产量会直接影响杀虫真菌农药的防治 效果和生产成本。因此，研究昆虫病原真菌生防相关性状及其分子机制，对充分 挖掘其在生物防治过程中的潜力，具有十分重要的理论意义和实际应用价值。 Sho1 是HOG-MAPK 信号传导途径上游的重要跨膜蛋白，在不同真菌中具有 不同的功能。HOG-MAPK 信号途径参与调节真菌的渗透压响应，在昆虫病原真菌 的生长发育、逆境耐受能力及致病过程中发挥着重要的作用。因此，膜蛋白Sho1 在蝗绿僵菌中可能也具有重要功能。本研究从蝗绿僵菌中克隆得到Sho1 的同源基 因MaSho1 并对其功能进行研究。生物信息学分析发现该基因编码306 个氨基酸， 具有四个跨膜结构域 （TM ）和一个SH3 功能域。通过构建MaSho1 敲除和回复菌 株，以及SH3 结构域缺失菌株，对MaSho1 和 SH3 结构域在蝗绿僵菌中的功能进 行了研究。研究结果表明，与野生型和回复菌株相比，ΔMaSho1 突变体的紫外耐 受性显著降低但抗湿热能力无显著影响；细胞壁完整性受到破坏，抗氧化和高渗 胁迫能力显著降低，且SH3 结构域参与调控氧化耐受性和高渗胁迫。体外点滴实 验表明，MaSho1 缺失后蝗绿僵菌的致病能力显著降低。此外，MaSho1 缺失后产 孢量显著提高，隔间距显著缩短，在 1/4 SDAY 培养基上的产孢方式发生了转换， 即由正常产孢转换为微循环产孢，但 SH3 结构域不参与调控产孢方式的转换且 MaSho1 的缺失不影响孢子萌发。对产孢时期数字表达谱分析发现，MaSho1 缺失 后在产孢过程中的差异表达基因有 103 个。其中由MaSho1 调控的49 个已知差异 表达基因中有23 个与菌丝发育、分枝、细胞分裂和产孢量相关。此外，参与调控 产孢相关途径的差异表达基因也受到MaSho1 的调控。这些结果表明，MaSho1 通 过调控产孢相关途径以及细胞分裂及分化相关基因的表达来抑制菌丝的生长，调 控产孢方式的转换，进而促进分生孢子的产生。 上述结果表明，MaSho1 不仅参与调控蝗绿僵菌的致病过程，而且通过调控的 菌丝生长和产孢方式的转换来影响蝗绿僵菌分生孢子产量。因此，进一步研究蝗 绿僵菌MaSho1 在调控产孢方式转换中的分子机制，有利于提高孢子产量和杀虫效 率，对今后的大规模生产具有重要的实际应用价值。 关键词：蝗绿僵菌；MAPK 途径；Sho1 ；微循环产孢；产孢方式转换 I 英文摘要 Abstract Entomopathogenic fungi have the advantages of being environmentally friendly, low possibility to induce insect resistance and capable of achieving sustained control of pest populations. However, the lower efficacy compared with chemical pesticides severely limits their largescale application. In entomopathogenic fungi, conidia are the mainly infecting organs as well as the beginning and ending of cell differentiation process, playing an important role in the process of