蝗绿僵菌转录因子MapacC的功能研究.pdfVIP

中文摘要 摘 要 昆虫病原真菌作为重要的生防资源，潜力巨大。昆虫病原真菌孢子的产量和 质量、逆境耐受性以及毒力是衡量杀虫真菌农药防效的重要指标。已有研究表明， C H 型转录因子pacC / Rim101 在真菌适应碱性pH 环境生长、产孢以及侵染致病 2 2 过程中起重要作用，且在不同真菌中其功能存在差异。目前pacC 在模式昆虫病原 真菌蝗绿僵菌中的功能还未见报道，本研究采用敲除和回复策略明确了转录因子 MapacC 的功能。 研究发现，与其他真菌中的pacC 相似，蝗绿僵菌中的pacC 蛋白含有3 个C H 2 2 型锌指结构，在蝗绿僵菌适应碱性环境生长过程中起重要作用。表达特征分析结 果表明，MapacC 在蝗绿僵菌侵入昆虫体内初期的表达量最高，推测该基因可能在 蝗绿僵菌适应昆虫体内环境或躲避寄主免疫反应过程中起重要作用。敲除MapacC 后蝗绿僵菌产孢量降低，抗紫外能力不变，但一些抵御热休克的基因表达量显著 升高导致蝗绿僵菌的耐热性增加。荧光染色分析发现，MapacC 缺失后蝗绿僵菌分 生孢子表面的结构发生了变化。敲除 MapacC 后蝗绿僵菌的毒力显著降低。侵染 过程分析发现，MapacC 缺失后对蝗绿僵菌附着胞的形成影响轻微，但在蝗虫体内 增殖速率显著降低，与受到野生型菌株侵染的蝗虫相比，接种了ΔMapacC 菌株孢 子的蝗虫血液中酚氧化物(PO)酶活显著升高，体壁上结节数量显著增多，说明 MapacC 可能在蝗绿僵菌躲避蝗虫的免疫识别过程中起重要作用。值得注意的是， 敲除MapacC 后蝗绿僵菌无法进行微循环产孢，RNA-seq 分析共筛选得到差异表 达基因44 个，其中27 个基因在MapacC 缺失后上调表达，17 个基因下调表达， 根据有注释信息的 34 个基因分析发现，MapacC 可能通过调控细胞分裂和菌丝生 长等过程中起重要作用的蛋白影响蝗绿僵菌的产孢模式转换。 综上所述，本研究明确了 MapacC 在蝗绿僵菌中的作用，发现该基因对蝗绿 僵菌的生防潜能具有重要贡献。本研究结果将为进一步阐明昆虫病原真菌的侵染 致病机制和丝状真菌产孢模式转换机制提供理论依据，有望为昆虫病原真菌的分 子改良提供新的候选基因，具有重要的理论意义和实际应用价值。 关键词：蝗绿僵菌；MapacC ；耐热性；毒力；微循环产孢 I 英文摘要 Abstract As an important biocontrol resource, entomopathogenic fungi had great potential. The conidial yield and quality, stress tolerance and virulence of entomopathogenic fungi are important indicators for measuring the efficacy of insecticidal fungi pesticides. Studies had shown that the C H transcription factor pacC / Rim101 plays an important 2 2 role in the growth of fungi in alkaline pH environment, sporulation and infection, and its function is different in different fungi. Until now, the function of pacC in the model entomopathogenic fungus Met