专题1 基因工程一轮复习演示版.pptVIP

二、基因表达载体的构建——核心 （1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用_________ __切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 1.过程: ;.; * 3.基因表达载体的组成： a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA识别并结合位点。 位于基因的末端,终止转录。 检测目的基因是否导入受体细胞。 2、基因表达载体的作用 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 ;.; * 三、将目的基因导入受体细胞 目的基因进入_____ ____内，并且在受体细胞内维持_ ___和___ __的过程。 转化: 受体细胞 稳定 表达 1、导入植物细胞: 2、导入动物细胞: 3、导入微生物细胞: 常用方法： 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射法 感受态细胞法（或Ca2+转化法） ;.; * 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 特点: 能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 ;.; * （2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 适用于单子叶植物 ;.; * （3）花粉通道法 花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 ;.; * 2、将目的基因导入动物细胞 方法: 显微注射技术 操作程序: 提纯含目的基因表达载体 取受精卵 显微注射 移植到子宫 受精卵发育 新性状动物 常用受体细胞： 受精卵 ;.; * 3、将目的基因导入微生物细胞 常用法：Ca2+处理 常用受体细胞：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA （用Ca2+处理，增加细菌细胞壁的通透性） 处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞 ;.; * (1)________________→目的基因的有无 (2)分子杂交技术→_________________ (3)_______________→目的基因是否翻译 (4)生物性状的表达与否→目的基因是否表达 (个体水平) DNA分子杂交技术 目的基因是否转录 抗原—抗体杂交 分子水平 四、目的基因的检测与鉴定 ;.; * 检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 1、导入检测 目的： 方法： DNA分子杂交技术 过程： ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针。 ③使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明目的基因已插入染色体DNA中 ;.; * 从转基因生物中提取的基因组DNA 探针： 杂交的对象： 用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段 15N 15N 14N 探针 转基因生 物的DNA 变性 变性 14N ;.; * 2、转录检测 目的： 检测目的基因是否转录出了mRNA 方法： 分子杂交技术 用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段 探针： 杂交的对象： 从转基因生物中提取的mRNA. ;.; * 3、翻译检测 目的： 检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法: 抗原抗体杂交技术 从转基因生物中提取的蛋白质 抗原： 抗体： 将目的基因编码的蛋白质注射进动物体内进行免疫产生的相应抗体 4、个体生物学水平的鉴定 抗虫鉴定、抗病鉴定、 活性鉴定等 ;.; * 1.转基因植物 类别 应 用 实 例 抗虫 抗病 抗逆 改良 杀虫的基因主要有Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等 抗病毒基因:病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因; 抗真菌基因:几丁质酶基因和抗毒素合成基因 抗盐碱和抗干旱的调节细胞渗透压基因、 抗冻蛋白基因、抗除草剂基因 ①转基因玉米中赖氨酸的含量比对照提高30% ②转基因延熟番茄储存时间可延长1～2个月 ③转基因矮牵牛呈现出自然界没有的颜色变异 1