组织匀浆制备.pdfVIP

组织匀浆制备 1 、取组织块（ ~1g ）最少可到 2 ～ 5mg ，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重， 放入 5 或 10ml 的小烧杯内 2 、用移液管量取预冷的匀浆介质（ ,L Tris-HCL, LEDTA-2Na,L 蔗糖％的氯化钠溶液）或者用％冷 生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的 9 倍，用移液管或移液器取总量 的 2/3 的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中 进行，将盛有组织的小烧杯放入冰水中）。 3 、匀浆的方式有多种：手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融。 手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的 1/3 匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧 杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿 中，右手将捣杆垂直插入套管中， 上下转动研磨数十次 （6 ～8 分钟） ，充分研碎， 使组织匀浆化。 机器匀浆：用组织捣碎机 10000 ～ 15000r/min 上下研磨制成 10 ％组织匀浆，也可用内切式组织 匀浆机制备（匀浆时间 10 秒 / 次，间隙 30 秒，连续 3～5 次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织 等可延长匀浆时间。 超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用 Soniprep150 型超声波发生器以振幅 14 微米超声处理 30 秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用 40 安培， 5 秒 / 次，间隙 10 秒反复 3 ～5 次。 反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶 3 次左右（即让细胞加 适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复 3 次左右），但有部 分酶活力会受影响。 取少量组织匀浆做涂片（直接涂片、染色均可），显微镜下观察细胞是否磨破，若没有破则可以 延长匀浆时间或增加冻融次数。 4 、将制备好的 10 ％匀浆用普通离心机或低温低速离心机 3000r/min 左右离心 10～ 15 分钟，若 检测 ATP 酶，则只需要 1000 转/ 分，离心 5 分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种测定。