长期施肥对土壤微生物量的影响.docxVIP

经典专科、本科、硕博、研究生、期刊毕业论文 仅供参考 精心整理 仅供参考 勿用作商业用途 长期施肥对土壤微生物量的影响 试剂购买 序号 试剂名称 规格 需要数量 （单位：瓶） 备注 1 牛肉膏 500g/瓶 1 未特别注明，所用化学试剂均为分析纯 2 蛋白胨 500g/瓶 2 3 琼脂 500g/瓶 4 4 可溶性淀粉 500g/瓶 2 5 葡萄糖 500g/瓶 2 6 氯化钠 500g/瓶 1 7 硝酸钾 100g 1 8 磷酸氢二钾 500g 1 9 7水硫酸镁 500g/瓶 1 10 硫酸亚铁 500g/瓶 1 11 孟加拉红 最小包装 12 链霉素 25g/瓶 1-2 13 NaOH 1 14 HCl 1 注：链霉素替代品 硫酸链霉素 25g/瓶 2 庆大霉素 仪器 仪器名称 规格 数量 仪器名称 规格 数量 搪瓷杯 1 移液枪（枪头） 1ml 15 玻棒 3 烧杯 1000ml 3 500ml 2 量筒 100ml 3 试管 10ml 70 10ml 3 培养皿 200 玻璃滴管 1 玻璃珠三角瓶 100ml 8 漏斗(过滤、培养基) 2 牛角匙 1 天平 1 乳胶管 1 弹簧夹 1 称量纸 若干 精密PH试纸 若干 酒精灯 1 接种环 3 记号笔 1 棉花（橡皮塞） 若干 高压蒸汽锅 1 牛皮纸/棉纱线/纱布 若干 铁架台（环） 1 电磁炉（搅拌器） 1 震荡机 1 放大镜 1 培养箱 1  培养基及配置方法 牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15～20g，水1000ml，pH7.0～7.2，121℃灭菌20min。 高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.5g，MgSO4 .7H2O 0.5g，FeSO4 0.01g，琼脂20g，水 1000ml，pH7.2～7.4。配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至1000ml。121℃灭菌20min。 马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g，蛋白胨5g，KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，1/3000孟加拉红（rosebengal，玫瑰红水溶液）100ml，琼脂15～20g，pH自然，蒸馏水800ml，121度灭菌30min。临用前加入0.03%链霉稀释液10ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 配制步骤 1、称量 按培养基配方比例依次准确地称取所需药品放入搪瓷杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，其他的放在称量纸上称量。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。 2、溶化 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，在电炉或搅拌器上加热使其溶解。待药品完全溶解后，加入琼脂，直至琼脂完全溶化，补充水分到所需的总体积。 3、调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，在用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH或1mol/L HCl，边加边搅拌，使其pH值达到要求。 4、分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。 分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 (1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。 (2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。 (3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 5、加塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，（试管7个一组加牛皮纸，棉线包扎；三角烧瓶牛皮纸以活结包扎；摇瓶培养用八层纱布）用记号笔注明培养基名称、组别、日期。 6、灭菌 将上述培养基以0.103MPa，121.3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。 7、搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 8、无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 简要步骤 在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌：1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15~30分钟。 检测方法 土壤中放线菌的检测 1、 在超净工作台中，无菌称取所取土样10g，分别溶于装90ml无菌水及玻璃珠三角瓶中，于摇床震荡30分钟。用移液管分别无菌吸取各样品土壤