微生物的实验室培养课件下载1.pptVIP

（ 1 ） 消毒定义： 利用较为温和的物理或化学方法，杀死物体表 面或内部的部份微生物的过程。 常见消毒方法： 附录 5 ① 煮沸消毒法 : 100℃煮沸 5-6min ② 巴氏消毒法 ： 70- 75 ℃下煮 30min 或 80 ℃ 下煮 15min ③ 化学药剂消毒法 : 用 75% 酒精等进行皮肤消毒，双氧水、碘 伏、碘酒进行伤口消毒 ; 氯气消毒水源。 ④ 紫外线消毒： 利用紫外线能破坏微生物机体细胞中的 DNA 或 RNA 的 分子结构，造成生长性细胞死亡或再生性细胞死亡，达到杀菌消毒的效果。 2. 消毒与灭菌 （ 2 ）灭菌的定义： 是指使用强烈的理化因素杀死物体内外 所有的 微生物，包括所有细菌的孢子、芽孢、霉菌及病毒， 而达到 完全无菌 的过程。 常见灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭 菌 ① 灼烧灭菌 接种环、接种针、试管口或瓶口 ? ② 干热灭菌： 160- 170 ℃下加热 1-2h 。 附录 4 ? 能耐高温、需要保持干燥的物品。如玻璃器皿、金属用具 ③ 高压蒸气灭菌： 100kPa 、121 ℃下维持 15-30min. 最常用的灭菌方法，可 以杀灭所有的生物，包 括最耐热的某些微生物 的休眠体，同时可以基 本保持培养基的营养成 分不被破坏。 附录 4 比 较 项 理化因素的 作用强度 消灭微生物 的数量 芽孢和孢子 能否被消灭 消 毒 较为温和 部分生活状 态的微生物 不能 灭 菌 强烈 全部微生物 能 消毒与灭菌的比较 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂（ 70% 酒精等） 紫外线 针对不耐高温的液体 接种室、超净工作台 能耐高温的，需要保持干燥的物品 灼烧法 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 接种工具（接种环等） 实验操作者的双手 培养皿等玻璃器皿 培养基 消毒方法 灭菌方法 实验操作者的衣服 1. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他 外来微生物污染外，还有什么目的？ 2. 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭 菌。如果需要，请选择合适的方法。 （ 1 ） 培养细菌用的培养基与培养皿 （ 2 ） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （ 3 ） 实验操作者的双手 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 （ 1 ）、（ 2 ）需要灭菌；（ 3 ）需要消毒 。 3. 微生物实验室培养的基本操作程序 1 、器具的灭菌（干热灭菌） 2 、培养基的配制 3 、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 4 、倒平板 5 、微生物接种 6 、恒温箱中培养 7 、菌种的保存 四、大肠杆菌的分离和纯化培养 （一）培养基的配置 （二）纯化大肠杆菌 1 、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 （ 1 ）计算、称量（配制固体培养基要加入琼脂） （ 2 ）溶化 （ 3 ）调 pH( 可以用盐酸或氢氧化钠调 ) （ 4 ）分装、包扎 （ 5 ）灭菌（高压蒸汽灭菌） （ 6 ）倒平板（ 操作步骤及注意事项 ） （ 7 ）无菌检查： 放于恒温箱中培养，检查灭菌是否彻底。 倒平板操作 1. 将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上， 右手拿锥形瓶， 左手拔棉塞 。 2. 右手拿锥形瓶，使 瓶口迅速通过火焰 。 3. 用 左手打开培养皿 一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶 中的培养基倒入培养皿。倒完后，立即盖上培养皿盖。 4. 待培养皿中的培养基 冷却凝固 （ 5-10 分钟）后，将平板 倒 置 安放。 倒完平板后放于 37 度恒温箱中培养 12-24h ，观察是否长出菌 落，检查灭菌是否彻底。 1. 培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？ 答： 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。 2. 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染 培养基。 3. 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4. 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来 培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平 板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基， 造成污染，又可以避免培养基的水分过快地挥发。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。 （二）纯化大肠杆菌 原理：设法在培养基上获得由一个细胞繁殖而来的肉 眼可见的 菌落 。 菌落是指单个或少数细菌在固体培养基上大量 繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态 结构的子细胞群体 菌落是鉴定菌种的重要依据。 菌落 细菌的菌落特征 因种而异 霉菌的菌落 特征 因种而异 菌落 ⑴平板划线法 （ 2 ）稀释涂布平板法 2. 接种方法： 交叉划线法 连续划线法 专题 2 : 微生物的培养与应用 课题 1 微