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黑龙江畜物兽医职业学院 Oi Animal Husbandry and Veterinary Scence 兽用生物制品 里讲教师:任平教授  项目7 诊断制品制造技术 项目七诊断制品制造技术 任务1血清学诊新抗原 任务2变态反应抗原 任务3标记抗体 任务4单克隆抗体的制备 NEy  项目7 任务1血清学诊断抗原抗原新战术 直接凝集反应 凝集反应抗原 间接凝集反应 沉淀反应抗原 NEy  项目7 实例1直接凝集反应抗原新制制造技术 鸡白痢鸡伤寒多价染色平板凝集抗原制造工序 菌种选育菌种是从多株鸡白痢沙门氏菌和 鸡伤寒沙门氏菌中筛选出的标准菌株(抗原 结构9、121、123)和变异菌株(抗原结构 9、121、122)各一株。要求:标准型菌株 对沙门氏菌因子血清O9、0123凝集,对 122不凝集或轻度凝集;变异型菌株对沙 门氏菌因子血清O9、O122凝集,对0123不 凝集 NEy  项目7 制造要点 诊断制品制造技术 工序1茵漩培养接种于硫代硫酸钠廿油琼脂扁瓶 基,大量培养 工序2天活0.3%甲醛溶液 工序3计數测定菌液浓度(3亿个/m)。 工序4标化将两菌株稀释为不同浓度的菌液,分 别与标准型和变异型的国际标准血清做平板凝集 试验,标化后配制抗原的菌液合适浓度。 工序5染色将结晶紫乙醇嵱液、甘油按适当比例 加入菌液中,充分混勺,即制成鸡白痢鸡伤寒多 价平板凝集抗原,分裝小瓶。 NEy  项目7 质量标准 诊断制品制造技术 成品应为紫色的混悬液体,静置后菌体下 沉,经振荡后呈均匀的悬浊液。将本品谪 于平板,2min内不应出现自凝颗粒。并且 按《中华人民共和国兽药典》(2005版 进行无菌检验、抗原效价测定、非特异性 检验等,应符合标准。检验合格的成品置 2~8℃保存,有效期为3年 NEy  项目7 实例2间接凝集抗原诊新能隔象造拉术 以红细胞致敏为例,简介间接凝集抗原的制造方法。 工序一、4%绵羊红细胞的制备:采集绵羊的血液与等量 的阿氏液况合,用pH7.2~74PBS液洗涤血细胞3次(每 次3000r/min离心5min),每次离心后弃去上清液和白细 胞,最后用PBS液配成4%的红细胞悬液 工序三、2%化红细胞悬液的制各:取5m4%红细胞悬 液与等量1:25000鞣酸PBS液合并,温和混勺,宝温静置 30min,用PBS液洗涤3次(每次2000/min寓心5min) 然后用PBS液配成2%的鞣化红细胞悬液 NEy  项目7 诊断制品制造技术 工序三、4%致敏红细胞的制各:取5m鞣化红细 胞与等量适当稀释的抗原液在50℃水浴中孵育 5min或4℃过夜,加入5m1:100稀释的健康兔血 清或含0.25%的牛血凊白蛋白的PBS液,离心洗 涤3~4次,用同一熔液配成4%致敏红细胞悬液。 最后测定致敏红细胞的凝集价:取标准阳性血清 用平板法或试管法进行方阵滴定,以测定致敏红 细胞的效价。能与最高稀释度的血清产生50%凝 集的致敏红细胞的最高稀释倍数即为致敏红细胞 凝集价,即最适使用浓度 NEy  项目7 沉淀抗原 诊断制品制造技术 沉淀抗原的一般制备程序为:对病原进行 人工培养或采集自然发病动物的组织,用 适当方法破碎细胞以制成病原体的可嵱性 抗原,经过天活、浓缩,即得到沉淀反应 抗原。 NEy  项目7 实例介绍(沉淀抗原的制备方法)诊制品造战术 鸟传染性法氏囊病APG抗原的制作 取传染性法氐囊病鸡的法氏囊组织,加入适量天 菌PBS液或生理盐水制成勻浆,经反复冻融或超 声波裂解,于4℃浸泡24h后3500~4000/m离 心30min,收集上请液;沉淀物加入适当PBS液 悬浮、浸泡后,再经10000min离心60min,收 集上清液;两次上清液合并,加入终浓度为 0.1%~0.4%的甲醛熔液,37℃作用20h,即成鸡 传染性法氏囊病APG抗原。将此抗原与标准阳性 血清做APG试验,24h后出现1~3条沉淀线为合 格。保存于20℃。 NEy