免疫学检测的方法.pptVIP

传统的免疫学方法仅局限于用体液免疫产生的抗体与各种抗原在体外进 行反应,因所用抗体均采自免疫后的血清,故称作血清学反应 (serological reaction) 现代免疫学方法既包括体液免疫,又包括细胞免疫的各种方法,并发展 出免疫诊断学( immunodiagnostics)和免疫学检测等分支技术学科。 一、抗原、抗体反应的一教规律 (1)特异性 (2)可逆性 (3)定比性 (4)阶段性 (5)条件依赖性  、抗原、抗间的主要反应 抗原与抗体间的各种反应 抗原种类 所需辅助因子 发生的反应 可溶性抗原 沉淀 细胞或颗粒抗原 无无无 凝集 鞭毛 定或凝集 细菌细胞 补体 路菌或杀菌 细菌细胞 吞磁细胞十补体 吞(调理) 红细胞 补体 溶血 细菌外毒素 无 毒素被中和 病毒体 病西被钝化 调理:指抗体(调理素)与细菌表面的抗原结合后,促进吞噬细胞 吞噬的作用。  检测技术种类 免疫学检测 c免疫凝集试验 免疫沉淀试验 酶联免疫试验 荧光免疫技术 免疫电镜技术 免疫印迹试验  )凝集反应( agglutination) 颗粒性抗原(完整的绀菌细胞或血细胞等)与相应的抗体在合适的条件下 反应并出现肉眼可见的凝集团现象,称凝集反应或直接凝集反应 (direct agglutination) 用于此反应中的抗原又称凝集原( agglutinogen),抗体则称凝集素 agglutinin)。 1.直接凝集反应 玻片法定性测抗原 试管法定量测抗体 2.问接凝集反应: 正向、反向、问接抑制 致敏红细胞、惰性胶体颗粒等  细菌凝集反应被广泛应用于细菌学的诊断。在凝集反应 中,将参与反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素 凝集法测定哈维氏弧菌抗体的效价 1稀释抗体 管号 磷酸盐缓冲液 0.90.9 兔抗X菌血清 2) 3 4) 2.玻片凝集法 A.用1m移液枪取6号离心管中的溶液一滴滴在载玻片的一端,另一端加一滴 磷酸盐缓冲液,然后分别加一滴准备好的X菌液 B.牙签混匀,至于显微镜下观察,看是否有凝集块的形成。 后取5 号管的溶液逐个重复1、2步骤 D.取有凝集块变为无凝集块时,那个有凝集反应的试管作为抗体的效价  ○○ 凝集 (+) 抗原抗体致敏颗粒 不凝集 间接凝集抑制反应  +○→○+ 成○○ 抗原载体致敏颗粒抗体 (RBC 正向间接凝集反应 待测 ○○ 抗体载体致敏颗粒抗原 鞣酸化RBC) 反向间接凝集反应  (二)沉淀反应( precipitation) 可溶性抗原与其相应的抗体在合适条件下反应,并出现肉眼可见的沉淀 物现象,称为沉淀反应。用于此反应中的抗原又称沉淀原( precipitinogen) ,抗体又称沉淀素( precipitin)。 1、测沉淀反应的经典方法—环状沉淀反应 . ring precipitation 已知抗体检测未知抗原的定性试验 加入抗原 毛细管 白色环状沉淀 抗体  Microscopic view Normal view 沉淀凝集反应  2、测沉淀反应的现代方法 (1)琼脂凝胶扩散试验 可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内向四周弥散,相遇时若比例相当,相 互结合形成抗原抗体复合物,出现混浊的沉淀线 a.单向琼脂扩散试验( simple agar diffusion) 沉淀环直径与抗原(或抗体)浓度成正比,可定量抗原(或抗体) 敏感性:1.25mg/m1。 玻片上琼脂中含抗体(或抗原) 24 小时观察结果 等距离打孔,孔中加抗原(或抗体)