碱性磷酸酶的提取.pptVIP

碱性磷酸酶的提取及其分离纯化 制作人：周晓玲 碱性磷酸酶介绍以及应用 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称AKP), 是一种有广泛使用价值的生化试剂, 可专一性地水解磷酸单酯化合物而释放无机磷。主要用于核酸研究, 分析、测定核苷酸顺序及其基因的重组、分离, 也是酶标免疫测定技术的常用工具酶之一, 药用化妆品中添加AKP有益于皮肤细胞的再生和新陈代谢, 还可用于核苷酸脱磷生产核苷等。 碱性磷酸酶的制备来源 AKP多数是从动物如小牛(或猪、鸡)肠粘膜、牛脾等动物脏器中提取制备，一般商品化的AKP都是从小牛肠道中分离得到。 AKP很少很少从微生物中分离，因为如果用原核表达，很可能造成折叠有问题，不一定有正确的酶活力。 碱性磷酸酶的提取方法——有机溶剂沉淀法 原理：乙醇、丙酮、正丁醇等有机溶剂可以通过降低介质的介电常数及对酶蛋白的脱水作用而降低酶的溶解度。 AKP溶于30%乙醇或33%丙酮。但在60%的乙醇或50%丙酮中则形成沉淀。通过离心可以使AKP和其他蛋白分离，从而得到纯化。反复进行纯化的操作，可以获得较高纯度的AKP。 碱性磷酸酶的提取方法——有机溶剂沉淀法 常用的有机溶剂： 乙醇:沉析作用强，挥发性适中，无毒常用于蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的沉析. 丙酮:沉析作用更强，用量省，但毒性大，应用范围不广.