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第一章 基因工程 一.基本工具 (一)限制性核酸内切酶 1.分布 :原核生物 2.作用 :一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列  ,并且在特定部位 进行切割 ,使两个核苷酸间的磷酸二酯键断开。 3.作用结果：产生黏性末端或平末端（二） DNA 连接酶 1.分类（ 1）E.coliDNA 连接酶来源：大肠杆菌 功能：只能连接黏性末端 （2） T4DNA 连接酶来源： T4 噬菌体 功能：连接黏性末端和平末端 2.作用：将 DNA 连接起来 （三）基因进入受体细胞的载体 1.条件（ 1）具有多个限制酶切割位点，供外源基因插入 （2）可自我复制或整合到染色体 DNA 中进行同步复制。 （3）具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择 2. 种类：λ 噬菌体的衍生物、动植物病毒、质粒 质粒：双链环状 DNA分子，最常用，要人工改造 二。基本操作程序 （一）目的基因的获取 1. 目的基因：编码蛋白质的基因或具有调控作用的因子 2. 获取方法（ 1）从基因文库中获取 ** 基因组文库，部分基因文库 （ 2）利用 PCR技术扩增目的基因 （ 3）化学方法直接人工合成：基因小，核苷酸序列已知 （二）基因表达载体的构建（核心步骤） 1. 目的 (1) 稳定存在，遗传给下一代（ 2）表达和发挥作用 2. 结构：启动子、目的基因、终止子、标记基因、复制原点** 启动子： RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录** 终止子：使转录在所需要的地方停止； ** 标记基因：鉴别受体细胞中是否含目的基因。 （三）将目的基因导入受体细胞 1. 转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内 维持稳定和表达 2. 将目的基因导入植物细胞（ 1）农杆菌转化法（ 2）基因枪法 （3）花粉管通道法 3. 将目的基因导入动物细胞：显微注射法 4. 将目的基因导入微生物细胞： Ca+处理使细胞处于感受态 ** 原核细胞特点：繁殖快，单细胞，遗传物质相对较少 （四）目的基因的检测与鉴定 1. 分子水平的检测 （ 1）检测受体细胞中是否插入了目的基因  :DNA 分子杂交技术 （ 2）检测目的基因是否转录出了 mRNA： DNA分子杂交技术 （ 3）检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原—抗体杂交法 ** 检测成功会出现杂交带 2. 个体生物学水平的鉴定：接种实验三．基因工程的应用 1. 动物、植物基因工程的成果 （ 1）植物：提高抗逆性、改良品质、生产药物； （ 2）动物：品种改良、建立生物反应器、器官移植； 2. 基因工程药物：细胞因子、抗体、疫苗、激素； 3. 基因治疗（ 1）概念： （2）方法体外基因治疗 体内基因治疗 四．蛋白质工程的崛起 1. 理论推测，人工合成 2. 基因工程，蛋白合成（自然界没有的蛋白质） 第二章 细胞工程 一 .细胞工程 1.原理和方法 :细胞生物学和分子生物学 2.操作水平 :细胞水平或细胞器水平 3.目的 :按照人们的意愿改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品 4.分类 :植物细胞工程和动物细胞工程二 .植物细胞工程的基本技术 (一 )植物组织培养技术 1.原理 :植物细胞具有全能性 2.条件 (1)材料 :离体 (2)培养基 :营养 激素 (3)外界条件 :无菌等 3.过程 :离体组织器官 脱分化 愈伤组织 再分化 胚状体 植株 (二 )植物体细胞杂交技术 1.概念 :不同种 杂种细胞 植物体 2.原理：植物细胞具有全能性 3.过程 (1)制备原生质体方法①酶解法 ②酶 :纤维素酶和果胶酶③结果 :获得原生质体 (2)诱导原生质体融合①方法 :a 物理法离心、振动、电激 b 化学法 :聚乙二醇 (PEG) ②标志 :杂种细胞再生出细胞壁 ③结果：形成杂种细胞 （ 3）杂种细胞的筛选： AA BB AB AB （ 4）植物组织培养：杂种细胞 杂种植株 4.意义：克服远缘杂交不亲和的障碍 ** 生殖方式：无性生殖 变异类型：染色体数目变异 （三）实际应用 1.植物繁殖的新途径 （ 1）微型繁殖：植物组织培养（ 2）作物脱毒：茎尖组织培养（ 3）人工种子：胚状体、芽  +  人工薄膜 ** 可加入固氮菌、抗生素、除草剂等有利于生长和提高产量 2.作物新品种的培育（ 1）单倍体育种 （ 2）突变体的利用 3.细胞产物的工产化生产 （ 1）细胞产物种类蛋白质、糖类、药物、香料、生物碱（ 2）一般为愈伤组织时期 取材 单个细胞 取材 单个细胞 细胞悬浮 10 代细胞 50 代细胞 第二课时 三．动物细胞工程 （一）动物细胞培养的过程  细胞株  细胞系 处理 培养 原代培养 传代培养 1.取材：胚胎细胞或幼龄动物的组织器官 2.处理：剪碎、胰蛋白酶或胶原蛋白酶 3.