中药制剂质量分析 高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素 高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素.pptVIP

中药制剂的杂质检查技术 ——高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素 * 目录 基础知识 1 必备知识 2 拓展知识 3 * 基础知识 黄曲霉毒素：主要由黄曲霉（aspergillus flavus）、寄生曲霉（aparasiticus）产生的次生代谢产物，它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。 《中国药典》2015年版柏子仁等19味易受黄曲霉毒素感染药材及饮片增加了“黄曲霉毒素”检査项目和限度标准。 方法：高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱法两种 本法系用高效液相色谱-串联质谱法测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。 必备知识 高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素 色谱条件与系统适用性试验 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：流动相A：l0mmol/L醋酸铵溶液 流动相B：甲醇 柱温：25℃ 流速：0.3ml/min 按下表进行梯度洗脱： 必备知识 高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素 时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 0?4.5 65→15 35→85 4.5?6 15→0 85→100 6?6.5 0→65 100→35 6.5?10 65 35 色谱条件与系统适用性试验 检测器：三重四极杆串联质谱仪、电喷雾离子源（ESI） 采集模式：正离子模式 各化合物监测离子对和碰撞电压（CE）见下表： 必备知识 编号 中文名 英文名 母离子 子离子 CE (V) 1 黄曲霉毒素G2 Aflatoxin G2 313.1 313.1 33 331.1 245.1 40 2 黄曲霉毒素G1 Aflatoxin G1 329.1 243.1 35 329.1 311.1 30 3 黄曲霉毒素B2 Aflatoxin B2 315.1 259.1 35 315.1 287.1 40 4 黄曲霉毒素B1 Aflatoxin B1 313.1 241.0 50 313.1 285.1 40 系列混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的标示浓度分别1.0μg/ml、3μg/ml、 1.0μg/ml、0.3μg/ml）适量，用70%甲醇稀释成含黄曲霉毒素B2、G2浓度为0.04~3ng/ml，含黄曲霉毒素B1、G1浓度为0.12~l0ng/ml的系列对照品溶液，即得（必要时可根据样品实际情况，制备系列基质对照品溶液） 必备知识 高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素 供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，置于均质瓶中，加人氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 必备知识 高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素 测定法 精密吸取上述系列对照品溶液各5μl，注人高效液相色谱-质谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液5μl，注入高效液相色谱-串联质谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的浓度，计算，即得。 必备知识 高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素 必备知识 高效液相色谱-串联质谱法检查黄曲霉毒素 注意事项 本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。 残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器 （装有10%次氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿 冲洗干净。 流动相单独收集，先用次氯酸钠灭毒，再按常规处理 当第一法测定结果超出限度时，采用本法进行确认 现行的2015版《中国药典》规定黄曲霉毒素检查的19种中药材，品种有： 根及根茎类：远志； 果实种子类：大枣、肉豆蔻、决明子、麦芽、陈皮、使君子、柏子仁、胖大海、莲子、桃仁、槟榔、酸枣仁、薏苡仁； 动物类：水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣、僵蚕。