仪器分析技术 仪器分析技术 任务6-2 液相色谱仪基本结构.pptVIP

1．梯度洗脱的特点 （1）改善分离, 加快分析速度； （2）改善峰形, 减少拖尾, 有利于痕量组分的检测； （3）增加峰容量； （4）强烈滞留的组分不容易残留在柱上, 保持柱性能长期良好； （5）下次分析时, 流动相需要一段平衡时间；不同溶剂的UV吸收程度稍有差异, 可能会引起基线漂移 2．梯度洗脱的主要条件 ① A 流动相/弱溶剂组成； ② B 流动相/强溶剂组成； ③ 梯度时间； ④ 梯度曲线：线性、凸型或凹型等。 强溶剂 A% time 1 2 5 梯度洗脱 1 2 3 除去柱上端固定相变色部分 (约3mm左右)，再补充新的固定相。 色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。 采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。 pH变化值 0.1 RS变化值1.6 色谱柱：Zorbax StableBond C18 4.6*250mm,5um 流动相：27%甲醇：73%磷酸 pH： 2.52.6 温度： 50℃ 流速： 1.0mL/min. 液相色谱的流动相 2. 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分 按极性分：极性、弱极性、非极性 按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱 对溶剂的要求 水： 去离子水 自动纯水仪 　　　 纯净水　　 商品瓶装水 溶剂: 色谱纯（甲醇，乙腈，乙醇，丙酮，异丙醇）　 试剂: 分析纯 不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要求越高放置时间越短。 理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 过滤与脱气 有机溶剂流动相： 室温下密封，避光保存 缓冲盐流动相： 当日现配现用： 低温下密封保存，一般不超过3天 防止微生物生长 有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相： 低温密封保存 防止有机相的挥发 选用适宜的容器 二、 进样系统 六通阀进样 装置 进样阀 三、 分离系统（色谱柱） 内径：1～6 mm，柱长：5～50 cm； 柱填料粒径：5 ～10μm 为保护色谱柱， 通常在柱前加一支填料与色谱柱相同的保护柱。 3）流动相 与GC流动相不同，HPLC流动相为溶剂，它既有运载作用，又和固定相一样，参予对组分的竞争，因此溶剂的选择对分离十分重要。 理想的溶剂应有下列特性： 1）对待测物具一定极性和选择性； 2）使用UV检测器时，溶剂截止波长要小于测量波长(为什么？) ；使用折光率检 测器，溶剂的折光率要与待测物的折光率有较大差别； 3）高纯度。否则基线不稳或产生杂峰，同时可使截止波长增加； 4）化学稳定性好； 5）适宜的粘度。粘度过高，柱压增加；过低，易产生气泡。 四、检测系统 类型 紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 电化学检测器 电导检测器 （一）、紫外吸收检测器—应用最广泛的 检测器 基本原理：试样组分对特定波长的紫外光具有选择性的吸收，吸光度与试样组分浓度之间的定量关系符合郎伯-比耳定律。 优点： 灵敏度高，线形范围宽； 死体积小； 波长可选； 对流速和温度变化不 敏感； 可用于梯度洗脱。 缺点： 无紫外-可见吸收组分不响应； 流动相选择受一定限制。 (a) 可变波长紫外检测器 (b) 二极管阵列检测器 （二）、示差折光检测器—通用型检测器 基本原理：连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光系数差值，该值与试样池流动相中的组分浓度成正比。 每种物质具有不同的折光指数。 生命科学中各类糖类化合物，没有紫外吸收，一般要用示差折光检测器。 缺点： 灵敏度低； 对温度敏感； 不能用于梯度洗脱。 （三）、荧光检测器—专用型检测器 基本原理：在一定的条件下，荧光强度与流动相中的组分的浓度成正比。 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。 特点：