实验13 经典免疫技术.ppt

实验十三 经典免疫技术 实验目的要求 ●1、掌握直接凝集反应的原理和操作方法 ●2、熟悉免疫标记技术的原理和操作方法 一、凝集反应 (一)实验原理 ●为一种血清学反应。颗粒性抗原(完整的病原 微生物或红细胞等)与相应抗体结合,在有电 介质存在的条件下,经过一定时间,出现肉眼 可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝 集原,抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应 和间接凝集反应两类。 1、直接凝集反应(原理) ●颞粒状抗原(如细茵、红细胞等)与相应抗体直接結合 所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法 (1)玻片法是一种定性试验方法。可用巳知抗体来检测 未知抗原。若鉴定新分离的菌种肘,可取已知抗体滴加 在玻片上,将待检菌漩一滴与其泥勺。数分种后,如出 现肉眼可见的凝纂现象,为阳性反应。该法简便快速, 除鉴定黄种外,尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的 ABO血型等。 2)试管法是一种定量试验的经典方法。可用已知抗原 来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。用来协助 临床诊新或供流行病学调查研究。操作时,将待检血清 用生理盐水连续成倍稀释,然后加入等量抗原,最高稀 释度仍有凝纂现彖者,为血溃的效价,也称滴度,以表 示血清中抗体的相对合量。诊断伤寰,副伤寒病的肥达 反应、布氏病的瑞特氏反应均属定量凝祟反应。 2、间接凝集反应 ●将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、一定大 小的颗粒状载体的表面,然后与相应抗体(或抗原)作用。在 有电介质存在的适宜条件下,即可发生凝集,称为间接凝集反 应。用做载体的微球可用天然的微粒性物质,如人(0型)和 动物(绵羊、家兔等)的红细胞、活性炭颗粒或硅酸铝颗粒等 也可用人工合成或天然高分子材料制成,如聚苯乙烯胶乳微球 等。由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积,当颗粒上的 抗原与微量抗体结合后,就足以出现肉眼可见的反应,敏感性 比直接凝集反应高得多。 (二)材料 ●标准抗A、抗B诊断血清;受测者红细胞、 盐水、采血针、棉球、玻片等。 ●待测细菌纯培养物,标准诊断血清 (三)方法(血型测定) 1.取一块清洁玻片,用记号笔划上记号,左上角写A 字,右上角写B字 2.用小滴管吸A型标准血清(抗B)一滴加入左侧,用 另一小滴管吸B型标准血清(抗A)一滴加入右侧 3.穿刺手指取血,玻片的每侧各放入一小滴血,用牙 签搅拌,使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签, 切勿混用 4.静置室温下数分钟后,在白色背景下肉眼观察,也 可显微镜观察 注意事项 1、采血时要尽量避免用力挤压手指或耳垂,以免发生 溶血影响结果 2、如肉眼观察难以辨认,可使用显微镜观察凝血现象 操作流程 B A B (三)方法(细菌菌型测定) 1.取一块清洁载玻片,用记号笔划上记号,在一侧滴加标 准的诊 一滴,另一侧滴加一滴生理盐 2.用接种环无菌操作取适量的待测细菌,分别与标准诊断 血清和生理盐水混均。 3.静置室温下数分钟后,在白色背景下肉眼观察,也可显 微镜观察 ●注意事项 1)生理盐水、诊断血清要适量; (2)待检茵为肠道致病菌,注意无菌操作,玻片用后放 入消毒缸内; (3)用接种环取待检菌时,不要挑取琼脂;待检菌与生 理盐水、诊断血清混匀时,不要涂得太宽,否则影响结 果观察 (四)结果判断 抗B 抗A Anti-B Anti-A B型 B type AB型 AB type O型 O tvpe