一个水稻矮秆窄叶突变基因的定位及早衰和雄性不育基因SMS1的功能分析.pdfVIP

一个水稻矮秆窄叶突变基因的定位及早衰和雄性不育基因 SMS1 的功能分析 常规粳稻秀水09经过甲基磺酸乙酯(EMS)诱变处理,获得了一个矮秆窄叶突 变体dnl1(dwar andnarrowleaf1)。本文对dnll突变体进行了相关表型分析、 突变性状的遗传分析和基因定位,并从组织细胞学的角度初步解释了dnll突变 体矮秆窄叶形成的原因。主要结论如下：1.dnl1突变体与野生型秀水09杂交,F1 表现出与秀水09相同表型。 F2 出现矮秆窄叶与高秆宽叶两种表型,经卡平方检验表明符合1：3,推定突 变性状由一对隐性基因控制。2.dnll突变体与野生型比较,自播种两周左右苗高 开始出现明显差异,dnl1突变体比野生型早开始分蘖且分蘖数明显多于野生型。 突变体的株高只有野生型的55.69%,而突变体的分蘖数则是野生型的2.19倍。 突变体的穗和茎秆各节间平均长度与野生型对应部分对比变化显著。野生型 上三叶平均宽度均是突变体的2倍以上,平均长度是突变体的1.6倍以上。3.通 过图位克隆的方法将DNL1基因定位到水稻4号染色体,经鉴定发现DNL1是NAZ1 的一个等位基因。 在DNL1基因8552bp处发生了G突变为A 的单碱基突变,从而导致对应编码 的氨基酸由天冬氨酸突变为天冬酰胺。4.石蜡切片结果显示,dnll突变体叶肉细 胞较野生型秀水09小。dnll突变体叶片横切切片展示出比同时期的野生型叶片 厚,两个维管束间的间距小。 茎秆纵切切片显示,dnll突变体茎秆细胞比秀水09要窄而短,茎秆细小且薄。 这些特征在组织细胞学上解释了dnll突变体在整体上比野生型矮化,叶片变窄 变短的原因。植物的衰老是植物生长发育过程中许多内外因素综合作用的结果。 研究植物衰老的诱发因素和调节机制对延缓植物的衰老有重要意义。对农作 物来说,延缓衰老能有效提高作物的产量,从而产生巨大的经济效益。细胞程序性 死亡(PCD)是植物衰老的一种表征,也是诱发植物衰老的重要因素之一。 雄性不育是一种广泛存在于开花植物中的现象,它在育种中有着重要的作用。 雄性不育系的应用不仅提高了杂交育种的效率,而且大幅提高了水稻的产量和品 质。杂交水稻生产体系的核心是雄性不育材料的发掘和利用。 本论文对一个导致水稻早衰和雄性不育的基因SMS1 进行了初步分析,主要 结论如下：1.生物信息学分析显示SMSl 基因编码一个UDP-葡萄糖焦磷酸化酶 (UGPase),它催化葡萄糖-1-磷酸和UTP 与UDP-葡萄糖和焦磷酸之间的转化。2. 应用水稻原生质体系统,将水稻SMS1CDS 融合YFP 报告基因的pA7-SMS1-YFP 双元 表达载体在水稻原生质体中表达。荧光共聚焦显微镜下,在细胞膜、细胞质、细 胞核均能观察到激发荧 ,由此推断SMSl 基因在水稻细胞中是遍在表达的。 3.成功构建SMS1Promoter 驱动GUS 报告基因的p1300-SMS1Pro-GUS 载体和 Ubi Promoter 驱动的pUN1301-SMS1-OE 过表达载体,通过农杆菌转化日本晴愈伤 组织获得转基因阳性株系。GUS 染色显示,SMS1 在叶片、叶鞘、节、节间、颖壳 等组织有表达,在叶鞘和节表达较强,而在叶尖和颖壳表达较弱。Real Time-PCR 结果显示,实验所取过表达转基因阳性株系较正常日本晴均有过表达,表达量最 高的接近正常日本晴表达水平的300 倍。 4.对sms1 突变体叶片不同部位和野生型叶片进行超薄切片观察,结果显示 sms1 突变体细胞出现空腔,细胞核膨大,表现出PCD 的特征,而野生型细胞内叶绿 体等内容物丰富。sms1 突变体的细胞壁疏松,棱廓模糊,部分细胞壁较薄,而野生 型细胞壁比较致密且棱廓清晰。由此推测sms1 突变体缺失编码UGPas 的SMS1 基因,导致细胞壁合成障碍,因此诱发了水稻的PCD过程,从而出现早衰表型。