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基因工程中限制酶的使用 这个过程中应使用的限制酶是_______________。
(2)第二种方案是用两种限制酶处理,应选择______________________。
一、处理质粒和处理含目的基因的DNA分子
(3)此项应用中,不能使用SmaI,原因是____________________________________________。
【练习1】下图乙是载体和反转录得到的胰岛素基因的片段,已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是
归纳总结——限制酶处理质粒和含目的基因的DNA分子的更多要求
—G↓GATCC—,限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。Gene Ⅰ和Gene Ⅱ为质粒上的标记
上述两种方案各有优缺点:
基因,根据图示分析,应用限制酶________切割质粒,用限制酶________切割含目的基因的DNA 用一种限制酶处理操作比较简单,但会出现其它的多种结果:
分子。 ①质粒原来产生的切口在DNA连接酶的作用下重新连接,从而不能和目的基因相连;同时,如果
目的基因较大,也可能_______________________________。
②除了产生目的基因和质粒两个DNA分子的连接情况,还可能出现的两个DNA分子连接的情况
是___________________________________________________。
③还可能出现目的基因反向连接的情况,出现反向连接时,将影响目的基因的_______________(复
制、表达、复制和表达)
用两种限制酶处理,虽然相对复杂,但有效地避免了上面的问题。这两种限制酶的要求是:_____
________________________ (切出相同的黏性末端、切出不同的黏性末端)。
归纳总结——限制酶处理质粒和含目的基因的DNA分子的基本要求: 二、有关限制酶切割DNA分子长度的分析
(1)处理质粒时,必须保留至少一个____________________,以及原来质粒上带有的与质粒复制 【练习3】已知某种限制性内切酶在一线性DNA 分子上有2 个酶切位点,如图中箭头所指,如果该
有关的_______________。 线性DNA 分子在2 个酶
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